[發(fā)明專利]一種基于熒光RMA法檢測高危型人乳頭瘤病毒的引物探針組、試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110224216.6
• 申請日: 2021-03-01
• 公開（公告）號: CN112725540A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姜梅杰;陳大為;陳龍;張瑤
• 申請（專利權(quán)）人: 濟南國益生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 濟南信在專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 37271
• 代理人: 殷盛江

本申請屬于生物技術(shù)檢測領(lǐng)域，具體為一種基于熒光RMA法檢測高危型人乳頭瘤病毒的引物探針組、試劑盒及其檢測方法，所述引物探針組包括檢測HPV16亞型的引物對及對應(yīng)的探針、檢測HPV18亞型的引物對及對應(yīng)的探針；所述HPV16亞型的檢測探針上標記的熒光報告基團是FAM，熒光淬滅基團是BHQ1；所述HPV18亞型的檢測探針上標記的熒光報告基團是CY5，熒光淬滅基團是BHQ2。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請屬于生物技術(shù)檢測領(lǐng)域，具體為一種基于熒光RMA法檢測高危型人乳頭瘤病毒的引物探針組、試劑盒及其檢測方法。

背景技術(shù)

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種小的球形環(huán)狀雙鏈DNA病毒，屬于乳頭瘤病毒科乳頭瘤病毒屬。它能特異性地引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖，可導致多種良、惡性病變。根據(jù)生物學特征和致癌潛能，把HPV分為低危型和高危型。低危型HPV包括HPV6、11、42、43、44等，常引起外生殖器濕疣等良性病變；高危型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等，與宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變的發(fā)生相關(guān)，尤其是HPV16和18型是公認的致癌能力最強的亞型。因此，有針對地進行HPV16和18型的檢測對宮頸癌的早期診斷具有重要意義。

目前HPV的檢測主要為電鏡檢查法、原位雜交法、實時熒光定量PCR等。其中，電鏡檢查法雖然準確率很高，但費時，需特殊儀器設(shè)備，且檢出陽性率很低；原位雜交法能夠提供有關(guān)HPV定位和物理狀態(tài)的有價值的信息，但是不能做到同一樣品中多重HPV型的型特異性檢測；熒光定量PCR方法對人員素質(zhì)及設(shè)備要求都很高，難于在基層診斷實驗室普及應(yīng)用。而重組酶介導擴增(Recombinase MediatedAmplification,RMA)技術(shù)，是近年來發(fā)展出的一種敏感、特異、簡便、快捷的等溫核酸擴增技術(shù)，被認為是可替代PCR的核酸檢測技術(shù)，主要依賴重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶三種酶。RMA反應(yīng)可以在37～42℃進行，整個過程在30min內(nèi)即可達到檢測水平，可實現(xiàn)HPV的快速檢測和分型。

本發(fā)明在熒光RMA法的基礎(chǔ)上開發(fā)了同時檢測HPV16、HPV18亞型的試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)的問題，本申請?zhí)峁┝艘环N基于熒光RMA法檢測高危型人乳頭瘤病毒的引物探針組、試劑盒及其檢測方法，本申請是通過下述方案實現(xiàn)的：

一種基于熒光RMA法檢測高危型人乳頭瘤病毒的引物探針組，包括檢測HPV16亞型的引物對及對應(yīng)的探針、檢測HPV18亞型的引物對及對應(yīng)的探針，其中：

(1)HPV16亞型引物和探針序列為：

HPV16-F：

5’-GTAGGTGTTGAGGTAGGTCGTGGTCAGCCATTA-3’；

HPV16-R：

5’-TACTGCAACATTGGTACATGGGGATCCTTTGCC-3’；

HPV16-P：

5’-AATTGGATGACACAGAAAATGCTAGTGC(FAM-dT)(THF)A(BHQ1-dT)GCAGCAAATGCAGGT(C3-spacer)-3’。

(2)HPV18亞型引物和探針序列為：

HPV18-F：

5’-AGCCTTTAGGTGTTGGCCTTAGTGGGCATCCAT-3’；

HPV18R：

5’-CAATAGCAGGGGCACAGCCCAAAATACATAACT-3’；

HPV18-P：