[發(fā)明專利]一種多鱗白甲魚精子高效超低溫冷凍保存方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110220908.3 | 申請日： | 2021-02-26 |
| 公開（公告）號： | CN112931488A | 公開（公告）日： | 2021-06-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 胡鵬;史慶超;覃川杰;周瑤;徐其林;易霞 | 申請（專利權(quán)）人： | 內(nèi)江師范學(xué)院 |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京化育知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11833 | 代理人： | 尹均利 |
| 地址： | 641000 *** | 國省代碼： | 四川;51 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 多鱗白 甲魚 精子 高效 超低溫 冷凍 保存 方法 | ||
1.一種多鱗白甲魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：
將多鱗白甲魚的精液與抗凍液按體積比1:35的比例混合，混合后經(jīng)過程序降溫處理，最終投入到液氮(-196℃)中分裝保存；抗凍液由稀釋液、抗凍劑和添加劑三部分組成，其中稀釋液由甲液、乙液組成，抗凍劑為35％(V/V)甘油，添加劑是10.0g/L海藻糖。
2.按權(quán)利要求1所述的多鱗白甲魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述稀釋液由甲液、乙液組成。其中，甲液：取NaCl 2.5g，KCl 0.02g，CaCl2·6H2O 0.2g，MgSO4·7H2O 0.2g，用雙蒸水配成950mL，熱壓消毒，冷卻。乙液：取NaHCO30.25g，Na2CO30.05g溶于100mL雙蒸水，過濾消毒。取甲液95mL，加入乙液5mL，配成100mL，即成稀釋液。
3.按權(quán)利要求1所述的多鱗白甲魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述抗凍液是將抗凍保護(hù)劑與稀釋液混合，制成比例為35％甘油(V/V)的混合液，并置于4℃冰箱備用。
4.按權(quán)利要求1所述的多鱗白甲魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：選用5.0mL的凍存管，每管加入120μL鮮活精液，再加入4.2mL的抗凍液(混合比1:35)，充分混勻，使抗凍保護(hù)劑充分滲入細(xì)胞中。
5.按權(quán)利要求1所述的多鱗白甲魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：稱取0.0432g添加劑海藻糖，加入到凍存管中，充分混勻，隨后放入4℃冰箱預(yù)冷15min。
6.按權(quán)利要求1所述的多鱗白甲魚精子高效超低溫冷凍保存的方法，其特征在于：將分裝后的精液采用兩步程序降溫法降溫處理，再投入液氮中長期保存，程序降溫程序?yàn)?～-60℃區(qū)間，-20℃/min，-60～-100℃區(qū)間，-40℃/min。
7.按權(quán)利要求1所述的多鱗白甲魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：將分裝保存于液氮中的多鱗白甲魚凍精進(jìn)行解凍，具體方法為：解凍時(shí)用鑷子將凍存管從液氮中取出，輕輕搖晃至沒有明顯液氮珠殘留，然后迅速將凍存管放入50℃恒溫水浴鍋中水浴解凍，待只剩一點(diǎn)冰核時(shí)取出。
8.按權(quán)利要求1所述的多鱗白甲魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：吸取精液，在淡水魚生理鹽水(取NaCl 7.5g，KCl 0.2g，CaCl20.2g，NaHCO30.2g，用蒸餾水配成1L)中激活，鏡檢其活力，然后用計(jì)算機(jī)輔助精子分析(CASA)系統(tǒng)計(jì)算精子運(yùn)動率等指標(biāo)。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于內(nèi)江師范學(xué)院，未經(jīng)內(nèi)江師范學(xué)院許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202110220908.3/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
