[發(fā)明專利]一種無血清培養(yǎng)基及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110219914.7
• 申請(qǐng)日: 2021-02-26
• 公開（公告）號(hào): CN112961825B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫振華;施坤寧;王星
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇普瑞康生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 北京林達(dá)劉知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

1.一種間充質(zhì)干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基，其中，所述無血清培養(yǎng)基包括：

基礎(chǔ)培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基的添加劑，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基與所述無血清培養(yǎng)基的添加劑的質(zhì)量比為(5-15)：1；

其中，所述無血清培養(yǎng)基的添加劑包括：含有基礎(chǔ)代謝類物質(zhì)的第一組分、含有細(xì)胞因子類物質(zhì)的第二組分，以及含有氧化還原類物質(zhì)的第三組分；以所述添加劑的總質(zhì)量為100％計(jì)，所述第一組分為6％-22％，所述第二組分為35％-47％，所述第三組分為43％-47％；

所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括氨基酸、維生素、無機(jī)鹽和脂類；

所述氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天門冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、谷氨酰胺的組合；

所述無機(jī)鹽為氯化鈣、氯化鉀、硫酸銅、碳酸氫鈉、硝酸鐵、氯化鈉、硫酸亞鐵、磷酸氫二鈉、氯化鎂、磷酸氫鈉、硫酸鎂、硫酸鋅的組合；

所述脂類為花生四烯酸、膽固醇、肉豆蔻酸、油酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、吐溫和F-68的組合；

所述維生素為生物素、氯化膽堿、泛酸鈣、葉酸、煙酰胺、鹽酸吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素B₁₂、肌醇的組合；

所述氨基酸的各組分在所述無血清培養(yǎng)基中的濃度如下：甘氨酸26.25mg/L，丙氨酸13.35mg/L，精氨酸273.9mg/L，天冬酰胺20.7mg/L，天門冬氨酸19.95mg/L，半胱氨酸17.56mg/L，胱氨酸55.29mg/L，谷氨酸22.05mg/L，L-組氨酸73.48mg/L，異亮氨酸106.87mg/L，亮氨酸111.45mg/L，賴氨酸163.75mg/L，甲硫氨酸32.34mg/L，苯丙氨酸68.48mg/L，脯氨酸28.75mg/L，絲氨酸36.75mg/L，蘇氨酸101.05mg/L，色氨酸19.22mg/L，酪氨酸91.79mg/L，纈氨酸99.65mg/L，谷氨酰胺265mg/L；

所述無機(jī)鹽的各組分在所述無血清培養(yǎng)基中的濃度如下：氯化鈣116.6mg/L，硫酸銅0.0013mg/L，硝酸鐵0.05mg/L，硫酸亞鐵0.417mg/L，氯化鎂28.64mg/L，硫酸鎂48.84mg/L，氯化鉀311.8mg/L，碳酸氫鈉1200mg/L，氯化鈉6995.5mg/L，磷酸氫二鈉71.02mg/L，磷酸氫鈉62.5mg/L，硫酸鋅0.432mg/L；

所述維生素的各組分在所述無血清培養(yǎng)基中的濃度如下：生物素0.0035mg/L，氯化膽堿9.98mg/L，泛酸鈣3.24mg/L，葉酸3.65mg/L，煙酰胺3.02mg/L，鹽酸吡哆醇3mg/L，核黃素0.319mg/L，硫胺素3.17mg/L，維生素B₁₂ 0.68mg/L，肌醇14.6mg/L；

所述脂類的各組分在所述無血清培養(yǎng)基中的濃度如下：花生四烯酸0.002mg/L，膽固醇0.22mg/L，肉豆蔻酸0.01mg/L，油酸0.01mg/L，棕櫚酸0.01mg/L，棕櫚油酸0.01mg/L，硬脂酸0.01mg/L，吐溫2.2mg/L，F(xiàn)-68 90mg/L；

所述添加劑的第一組分為維生素、脂類、L-谷氨酰胺、L-抗壞血酸-2-磷酸、β-巰基乙醇、地塞米松和氫化可的松的組合；

所述添加劑的第二組分為bFGF、TTR、IGF、VEGF、LIF、HGF、CTGF、β細(xì)胞素、IL-8、重組人纖連蛋白和人血清白蛋白的組合；

所述添加劑的第三組分為人血清白蛋白、左旋肉堿、乙醇胺、半乳糖、腐胺、亞硒酸鈉、皮質(zhì)酮、亞油酸、亞麻酸、硫辛酸、黃體酮、生育酚、生育酚乙酸酯、谷胱甘肽、胰島素、超氧化物酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白、三碘甲狀腺原氨酸和過氧化氫酶的組合；

所述第一組分的各組分在所述無血清培養(yǎng)基中的濃度如下：所述維生素的濃度為93.1mg/L，所述脂類的濃度為92.6mg/L，所述L-谷氨酰胺的濃度為292mg/L，所述L-抗壞血酸-2-磷酸的濃度為50mg/L，所述β-巰基乙醇的濃度為4.3mg/L，所述地塞米松的濃度為4ng/ml，所述氫化可的松的濃度為3.62ng/ml；

所述第二組分的各組分在所述無血清培養(yǎng)基中的濃度如下：所述bFGF的濃度為10ng/ml，所述TTR的濃度為10ng/ml，所述IGF的濃度為10ng/ml，所述VEGF的濃度為10ng/ml，所述LIF的濃度為10ng/ml，所述HGF的濃度為10ng/ml，所述CTGF的濃度為10ng/ml，所述β細(xì)胞素的濃度為5ng/ml，所述IL-8的濃度為2ng/ml，所述重組人纖連蛋白的濃度為5μg/ml，所述人血清白蛋白的濃度為1mg/ml；

所述第三組分的各組分在所述無血清培養(yǎng)基中的濃度如下：所述人血清白蛋白的濃度為1mg/ml，所述左旋肉堿的濃度為2μg/ml，所述乙醇胺的濃度為1μg/ml，所述半乳糖的濃度為15μg/ml，所述腐胺的濃度為16.1μg/ml，所述亞硒酸鈉的濃度為0.01435μg/ml，所述皮質(zhì)酮的濃度為0.02μg/ml，所述亞油酸的濃度為1μg/ml，所述亞麻酸的濃度為1μg/ml，所述硫辛酸的濃度為0.047μg/ml，所述黃體酮的濃度為0.0063μg/ml，所述生育酚的濃度為0.1μg/ml，所述生育酚乙酸酯的濃度為0.1μg/ml，所述谷胱甘肽的濃度為1μg/ml，所述胰島素的濃度為4μg/ml，所述超氧化物酶的濃度為2.5μg/ml，所述轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度為5μg/ml，所述三碘甲狀腺原氨酸的濃度為0.002μg/ml，所述過氧化氫酶的濃度為2.5μg/ml。