[發明專利]一種超長鏈核酸合成生產工藝

有效

• 申請號: 202110219552.1
• 申請日: 2021-02-26
• 公開（公告）號: CN113041967B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 雍金貴;劉宗文;錢鑫
• 申請（專利權）人: 通用生物（安徽）股份有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;B01J19/00
• 代理公司: 合肥正則元起專利代理事務所(普通合伙) 34160
• 代理人: 劉生昕

本發明公開了一種超長鏈核酸合成生產工藝，包括以下步驟：第一步、微量合成柱的制備；第二步、超長鏈核酸合成；第三步、超長鏈氨解處理；本發明提供一種超長鏈核酸合成生產工藝，合成開始先使用蓋帽反應一至兩次，便于引物充分固定在固相載體上，提高引物得率，降低小分子殘留含量，載體體積小，利于試劑充分接觸反應，其次2000A的CPG粉增加了粉塵間的間隙，不易造成載體內部空隙的堵塞，利于反應的持續充分發應，針對企業而言合成超長鏈工藝的完善，能夠降低全基因生產難度及引物使用成本，縮短的生產周期及交付周期。提高企業在行業中的競爭力。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，具體的，涉及一種超長鏈核酸合成生產工藝。

背景技術

超長鏈核酸合成工藝能有效改善引物合成質量。超長鏈引物合成能降低引物設計難度，減少后續PCR擴增次數，從而降低PCR擴增及檢測中出現問題發生的概率，降低引物使用成本，提高引物質量，縮短產品的交付周期，換言之，用更低的成本合出更優的產品，現在市場上引物合成技術相對而言較為成熟，但合成的引物序列長度有限，一般高于120bp，合成出的引物質量明顯較差。換言之，如果有引物合成公司能夠提高堿基序列長度，必然能提高企業在行業中的地位。其次，微量合成超長鏈工藝的完善，能夠降低全基因生產難度及引物使用成本，縮短的生產周期及交付周期。提高企業在行業中的競爭力。但現有的超長鏈核酸合成生產工藝繁瑣，操作不變，產物純度低。

發明內容

本發明的目的在于提供一種超長鏈核酸合成生產工藝。

本發明需要解決的技術問題為：

現有技術中，超長鏈核酸合成生產工藝繁瑣，操作不變，合成出的引物質量明顯較差，產物純度低。

本發明的目的可以通過以下技術方案實現：

一種超長鏈核酸合成生產工藝，包括以下步驟：

第一步、微量合成柱的制備

1）稱取購買30-40umol/g的2000A通用CPG粉，以CPG：聚乙烯=1：28.8的比例稱取，混勻，得到S1粉并用密封干燥容器裝好備用；

2）取制作好的模具，模具布有孔直徑為4mm，高為2mm上下貫通的圓柱形空孔；將制好的S1粉填充嚴實到模具孔中，孔上下用平面玻璃密封卡緊，做好備用S2；

3）將烘箱打開，溫度設置到200℃，當烘箱加熱到200℃，打開烘箱將S2放進烘箱，打開烘箱此時注意使溫度降到170℃左右，關閉烘箱加熱至196℃時將模具取出，燒制時間控制在25min左右，如果溫度提前到達196℃，可適當將烘箱門打開，低溫燒制時間稍長點不影響，保證燒制出的載體切開有顆粒狀即可，模具取出冷卻后，用直徑3.8mm的圓柱形工具將載體捅出，將邊緣及表面完整的載體挑出，用密封干燥容器裝好備用S3。

4）取定做的上內直徑為4.5mm，下內直徑為3.2mm的合成空柱，將S3用工具捅至適當位置，保證載體與空柱接觸無間隙，制成微量合成柱S4,用密封干燥容器裝好備用。

第二步、超長鏈核酸合成

1）單體用無水乙腈按1:40比例溶解，加入分子篩除水備用；

2）調節儀器參數，清潔儀器，檢測儀器試劑噴打及儀器密封；

3）設定試劑參數，儀器單次反應試劑量設定；

4）程序設置：通過壓力調節試劑滲透使試劑充分反應，開始合成前用乙腈清洗微量合成柱，并優先進行一次蓋帽反應，去除游離羥基。因合成鏈過長，可采用分段合成，在合成到60以上堿基時，可適當增加單體反應遍數，并適當加長試劑反應時長。以便充分反應。

5）合成結束，通過對收集的DMT顏色，來大概判斷此次合成效果。

第三步、超長鏈氨解處理