[發明專利]一種基于磁微粒化學發光的新冠病毒中和抗體檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202110211043.4
• 申請日: 2021-02-25
• 公開（公告）號: CN113009153A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 歐蘭香;陳振;王巖;丁興龍;武建偉;陳文麗
• 申請（專利權）人: 山東萊博生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/569;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 陳桂玲

1.一種基于磁微粒化學發光的新冠病毒中和抗體檢測試劑盒，由設在盒體內的偶聯有RBD蛋白1的磁微球、作為陽性對照的RBD中和抗體標準品溶液、陰性對照、樣品稀釋液、RBD蛋白2酶結合物、20×濃縮洗滌液、發光液構成；

其特征在于：

所述磁微球偶聯有濃度為5-20μg/mg的重組RBD蛋白1；該磁性微球的工作濃度為0.2-0.5mg/mL，稀釋液為保存液；

所述RBD中和抗體標準品溶液為：樣品稀釋液稀釋的濃度為1000ng/ml的RBD中和抗體溶液；

所述陰性對照為正常人新冠病毒SARS-CoV-2抗體陰性血清；

所述樣品稀釋液的配方是：除菌的1000mL純水中，含NaCl 8g、NaH₂PO₄·2H₂O 0.2g、Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g、CTAB 1g、酪蛋白鈉鹽5g、TritonX-100 0.1mL、Proclin300 1mL，pH為7.4；

所述RBD蛋白2酶結合物是辣根過氧化物酶標記的重組RBD蛋白2；該RBD蛋白2酶結合物使用的效價濃度為1:10000，稀釋液為酶結合物稀釋液；

所述20×濃縮洗滌液的配方是：除菌的50mL雙蒸水中，含NaCl 8.0g、NaH₂PO₄·2H₂O0.2g、Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g、吐溫20 0.5mL；

所述發光液包括A液和B液，濃度為3.0mmol/L的魯米諾溶液與0.3mmol/L對碘苯酚溶液等體積比的混合液命名為A液；濃度為7.5mmol/L的過氧化脲命名為B液；使用時將A液與B液按體積比1﹕1混合。

2.根據權利要求1所述基于磁微粒化學發光的新冠病毒中和抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述磁微球的制備方法是：

1.1)配制偶聯緩沖液：即配制0.01mol/L的MES緩沖溶液，并調整pH值為6.0；

MES 1.95g

純化水 定容至1000mL

過濾除菌，4℃保存；

1.2)配制洗滌液，洗滌液的配方及制法是：

過濾除菌，4℃保存；

1.3)配制保存液，保存液的配方及制法是：

過濾除菌，4℃保存；

1.4)偶聯操作

(1)RBD蛋白1酸化處理

酸處理：取1mL濃度為1mg/mL的RBD蛋白1溶液至2.0mL低吸附EP管，向EP管加入0.2mL酸化處理液A，室溫40rpm滾軸混勻30min；

中和：向酸處理后的RBD蛋白1溶液中加入0.4mL處理液B中和，緩慢吸打后備用；其中：

處理液A：

硼酸 1.06g

磷酸二氫鈉 2.34g

超純水 定容至100mL

調pH值至2.0；

過濾除菌，4℃保存；

處理液B：

硼酸 1.06g

磷酸二氫鈉 2.34g

超純水 定容至100mL

調pH值至9.5；

過濾除菌，4℃保存；

(2)羧基磁性微球的活化：取5mg羧基磁性微球，加入500μL的EDC/NHS溶液室溫下活化30min，磁分離，偶聯緩沖液洗滌磁性微球，得活化后的磁性微球；

其中，所述EDC是：1-乙基-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，所述NHS是：N-羥基丁二酰亞胺，其溶液使用偶聯緩沖液為溶劑配制，其濃度均為2mg/mL，使用前將EDC與NHS溶液等體積比混勻即得到EDC/NHS溶液；

(3)羧基磁性微球與酸化RBD蛋白1偶聯：向上述活化后的磁性微球中加入濃度為0.5-1mg/mL的酸化RBD蛋白1，使磁微球偶聯RBD蛋白1的濃度為5-20μg/mg，室溫反應3h，磁分離，洗滌液洗滌，使用孔徑為10μm的有機系尼龍微孔濾膜抽濾磁珠，抽濾過程中持續攪拌，即得免疫磁性微球，加保存液于4℃保存，備用；使用時用保存液稀釋使磁性微球的工作濃度為0.2-0.5mg/mL。