[發(fā)明專利]一種人iPSC來源的錐體神經(jīng)細(xì)胞前體細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110207737.0
• 申請日: 2021-02-24
• 公開（公告）號: CN112852736A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳志國;李默
• 申請（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/0793
• 分類號: C12N5/0793;C12N5/071;A61K35/30;A61P25/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 董大媛

1.一種人iPSC來源的錐體神經(jīng)細(xì)胞前體細(xì)胞的制備方法，包括以下步驟：

1)將人iPSC接種于matrigel基質(zhì)膠上，并用iPSC專用培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)2d后，獲得預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞；

2)將所述預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞置于第一誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中進行第一誘導(dǎo)分化培養(yǎng)獲得第一分化細(xì)胞；

3)將所述第一分化細(xì)胞置于第二誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中進行第二誘導(dǎo)分化培養(yǎng)獲得第二分化細(xì)胞；

4)將所述第二分化細(xì)胞置于第三誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中進行第三誘導(dǎo)分化培養(yǎng)獲得錐體神經(jīng)細(xì)胞前體細(xì)胞；

所述第一誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為DDM培養(yǎng)基+終濃度0.2～2μmol/L的Dorsomorphin+20mL/L的B27；

所述第一誘導(dǎo)分化培養(yǎng)的時間為14～18d；

所述第二誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為DDM培養(yǎng)基+20mL/L的B27；

所述第二誘導(dǎo)分化培養(yǎng)的時間為7～9d；

所述第三誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為DDM培養(yǎng)基+終濃度5～15mmol/L的ROCK inhibitor+20mL/L的B27；

所述第三誘導(dǎo)分化培養(yǎng)的時間為6～8d。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述第一誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中Dorsomorphin的終濃度為0.8～1.2μmol/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述第一誘導(dǎo)分化培養(yǎng)過程中，每2～4d更換一次第一誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基。

4.權(quán)利要求1～3任意一項所述的制備方法制備獲得的錐體神經(jīng)細(xì)胞前體細(xì)胞。

5.權(quán)利要求4所述的錐體神經(jīng)細(xì)胞前體細(xì)胞在制備治療脊髓損傷的藥物中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物中的錐體神經(jīng)細(xì)胞前體細(xì)胞的濃度為1×10³～1×10⁶個/μL；所述藥物中還包括細(xì)胞重懸液。

7.權(quán)利要求4所述的錐體神經(jīng)細(xì)胞前體細(xì)胞在制備促進產(chǎn)生神經(jīng)營養(yǎng)因子的藥物中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求4所述的錐體神經(jīng)細(xì)胞前體細(xì)胞在制備調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞M1和M2亞型平衡的藥物中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述錐體神經(jīng)細(xì)胞前體細(xì)胞抑制M1亞型小膠質(zhì)細(xì)胞在脊髓損傷部位的增殖。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述錐體神經(jīng)細(xì)胞前體細(xì)胞促進M2亞型小膠質(zhì)細(xì)胞在脊髓損傷部位的增殖。