[發明專利]一種適用于擬莖點霉FS508的過表達載體及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 202110204404.2
• 申請日: 2021-02-23
• 公開（公告）號: CN112852647B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 葉偉;劉珊;章衛民;李賽妮;張維陽;劉洪新;許麗瓊
• 申請（專利權）人: 廣東省科學院微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12N15/54;C12N15/80;C12P17/06;C12R1/645
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 朱雙;劉明星

1.一種提高擬莖點霉FS508中抗腫瘤化合物lithocarpins產量的方法，其特征在于，是在擬莖點霉FS508中過表達GPAT基因，所述的GPAT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，是將GPAT基因插入到表達載體中，然后轉化至擬莖點霉FS508中進行過表達。

3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，限制性內切酶EcoRⅠ和BamHⅠ雙酶切質粒pBARGPE1-Hygro，根據酶切后的pBARGPE1的序列和GPAT序列，設計GPAT引物pBARGPE1-GPAT-F：5’-gataagcttgatatcgatggcaaaaggggccg-3’， pBARGPE1-GPAT-R：5’-gactctagaggatctcagtggtggtggtggtg-3’，擴增GPAT基因片段，利用同源重組的方法將GPAT基因片段構建到已酶切的質粒pBARGPE1，構建pBARGPE1-GPAT載體，然后將pBARGPE1-GPAT載體通過原生質體轉化法導入擬莖點霉FS508原生質體中。

4. 一種產lithocarpins的工程菌株，其特征在于，是在擬莖點霉FS508中過表達GPAT基因而獲得的工程菌，所述的GPAT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5. 一種適用于擬莖點霉FS508的pBARGPE1-GPAT載體的構建方法，其特征在于，是將GPAT基因插入到pBARGPE1載體中，所述的GPAT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

6. 根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于，限制性內切酶EcoRⅠ和BamHⅠ雙酶切質粒pBARGPE1-Hygro，根據酶切后PBGEⅠ的序列和GPAT序列，設計GPAT引物PBGE1-GPAT-F：5’-gataagcttgatatcgatggcaaaaggggccg-3’， PBGE1-GPAT-R：5’-gactctagaggatctcagtggtggtggtggtg-3’，擴增GPAT基因片段，利用同源重組的方法將GPAT基因片段構建到已酶切的質粒pBARGPE1，構建pBARGPE1-GPAT載體。

7.一種根據權利要求5或6所述的構建方法構建得到的pBARGPE1-GPAT載體。