[發明專利]基因修飾的間充質干細胞外泌體的制備及其應用

有效

• 申請號: 202110204230.X
• 申請日: 2021-02-23
• 公開（公告）號: CN112877294B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 馬杰;焦平;王偉;李佳霖
• 申請（專利權）人: 賽浦生物科技（長春）有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/24;C12N15/861;A61K35/28;A61K35/51;A61K35/50;A61K9/12;A61K47/38;A61P11/02;A61P37/08
• 代理公司: 北京云嘉湃富知識產權代理有限公司 11678
• 代理人: 程凌軍

本發明公開了一種基因修飾的間充質干細胞外泌體及其制備方法以及其在過敏性鼻炎治療中的應用，主要通過分子生物學手段構建IL?27表達的基因序列，構建哺乳動物細胞表達載體，進一步轉染間充質干細胞，并獲得基因修飾的間充質干細胞外泌體。本發明對過敏性鼻炎具有顯著的治療效果，具有較大的經濟和社會效益，市場前景較好。

技術領域

本發明屬于生物制藥技術領域，涉及一種基因修飾的間充質干細胞外泌體的制備及其應用，尤其涉及一種基因修飾的間充質干細胞外泌體的制備及其在過敏性鼻炎治療中的應用。

背景技術

過敏性鼻炎又稱為變應性鼻炎，是由IgE介導通過釋放組織胺、激肽類和白三烯等誘發的鼻黏膜I型變態反應性疾病。發病癥狀主要表現為鼻癢、鼻塞、噴嚏、流清涕、嗅覺障礙等，隨著病程的進展，可伴有記憶力低下和咽炎等多種疾病，嚴重影響患者的工作及生活質量。該病為人類總常見的慢性病之一，近年來由于全球氣候變化、環境污染、社會和心理壓力等方面的影響，其發病率呈逐年升高趨勢，被視為“21世紀”的流行病，全球約25％的人群深受其擾。

目前過敏性鼻炎的治療主要包括三方面，避免接觸過敏原、藥物治療和免疫治療。對于已知的過敏原應盡量避免與之接觸，但生活中不可避免接觸花粉、塵螨和某些食物等過敏原。免疫治療主要指過敏原特異性免疫治療，但其治療過程繁瑣，治療周期長(往往需3年左右)，見效慢，費用高，大多數患者難以堅持，而且治療的安全性仍存在不確定性。藥物治療仍然是過敏性鼻炎的首選治療方法，臨床用藥主要有糖皮質激素、抗組胺類藥、減充血劑、抗膽堿藥和肥大細胞膜穩定劑5類。治療中，常以糖皮質激素和抗組胺類藥為主，另外3類藥為輔。抗組胺類藥對鼻癢、噴嚏、流清涕有較好效果，但對鼻塞效果不明顯；減充血劑能有效地緩解鼻粘膜充血，但對其它癥狀無效；抗膽堿藥對緩解流清涕效果好，但對鼻塞、噴嚏癥狀無效，還有導致鼻腔干澀和出血的副作用；肥大細胞膜穩定劑具有較好的預防過敏性鼻炎的效果，對于已經產生的過敏介質不具有拮抗作用，對過敏性鼻炎的急性發作療效不佳；糖皮質激素可從多個環節阻斷鼻黏膜的過敏性炎癥反應，能有效預防和治療過敏性鼻炎的癥狀，為目前治療過敏性鼻炎最有效的一線藥物，但其起效緩慢，在用藥數日或數周后起效，具有局部刺激的副作用，且糖皮質激素長期局部應用的副作用和遠期療效仍需循證醫學的評價。

鑒于上述，本發明旨在提供一種基因修飾的間充質干細胞外泌體、制備方法及其應用，來解決上述的一個或多個技術問題。

發明內容

為了解決現有技術中的一個或多個技術問題，申請人研究發現，利用IL-27基因修飾間充質干細胞外泌體，對治療過敏性鼻炎具有良好的效果，通過分泌表達IL-27因子，增強了間充質干細胞外泌體的免疫調節和抗過敏的功能，能夠很好地修復鼻腔微環境，改善過敏性鼻炎的癥狀，克服現有過敏性鼻炎治療藥物所存在的副作用和治療效果不佳問題。

為實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：

根據本發明一方面，提供了一種用于過敏性鼻炎的基因修飾的間充質干細胞外泌體，其特征在于通過以下步驟獲得：

設計獲得哺乳動物細胞高效表達IL-27的核酸序列，該哺乳動物細胞高效表達IL-27的核酸序列包含tPA信號肽編碼序列、IL-27B鏈編碼序列、linker序列和IL-27A鏈編碼序列，如SEQ ID NO.1所示；

將所述哺乳動物細胞高效表達IL-27的核酸序列轉入間充質干細胞獲得基因修飾的間充質干細胞；

培養該基因修飾的間充質干細胞獲得所述基因修飾的間充質干細胞外泌體。

根據本發明又一方面，還提供了一種用于過敏性鼻炎的基因修飾的間充質干細胞外泌體的制備方法，其特征在于以下步驟：

a.設計獲得哺乳動物細胞高效表達IL-27的核酸序列，該哺乳動物細胞高效表達IL-27的核酸序列包含tPA信號肽編碼序列、IL-27B鏈編碼序列、linker序列和IL-27A鏈編碼序列，如SEQ ID NO.1所示；