[發明專利]一種免疫增強型外泌體水凝膠復合物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110203774.4
• 申請日: 2021-02-24
• 公開（公告）號: CN112933113B
• 公開（公告）日: 2021-10-12
• 發明（設計）人: 宋金方;倪江;葉琳嵐;馬昂;李霞;丁永娟
• 申請（專利權）人: 江南大學附屬醫院
• 主分類號: A61K35/15
• 分類號: A61K35/15;A61K9/06;A61K31/12;A61K31/122;A61K31/185;A61K31/337;A61K31/352;A61K31/575;A61K31/704;A61K45/06;A61K47/36;A61K47/42;A61P35/00;A61
• 代理公司: 南京中律知識產權代理事務所(普通合伙) 32341
• 代理人: 沈振濤

本發明公開了一種免疫增強型外泌體水凝膠復合物及其制備方法和應用，所述復合物是由M1型巨噬細胞外泌體包載藥物形成藥物?M1型巨噬細胞外泌體，然后通過甘露聚糖肽和透明質酸的化學交聯形成水凝膠，將所述藥物?M1型巨噬細胞外泌體負載在所述水凝膠中，所形成的水凝膠遞藥系統。本發明制備的甘露聚糖肽?透明質酸水凝膠不僅具有席夫堿型凝膠的酸敏釋藥、可注射、自愈合等優點，還具有抗腫瘤免疫增強、增加外泌體穩定性、腫瘤黏附性、生物可降解、生物安全性等效果，于腫瘤局部注射給藥后可緩釋藥物?M1型巨噬細胞外泌體，靶向滲透至腫瘤及腫瘤炎癥區域，激活腫瘤免疫，協同殺傷腫瘤。

技術領域

本發明公開了一種免疫增強型外泌體水凝膠復合物及其制備方法和應用，屬于水凝膠復合物技術領域。

背景技術

惡性腫瘤嚴重威脅人類健康，現有治療方案如手術、化療、放療、靶向治療、免疫治療均存在一定局限性。盡管化療+免疫的腫瘤聯合治療已為常用手段，但其多采用系統性給藥方案，存在腫瘤選擇性低、免疫應答效率弱、毒副作用大等缺點，限制了臨床應用。

近年來，腫瘤局部給藥作為系統性治療的一個有效改善方案，成為抗腫瘤領域研發熱點之一。外泌體是一種由細胞分泌的具雙層脂質膜結構的納米囊泡，作為一種極具應用前景的藥物遞送載體，具有低毒、無免疫原性、滲透性好等優點。研究證實，M1型巨噬細胞具有腫瘤及腫瘤炎癥趨向性，可用于抗腫瘤藥物的靶向遞送。值得關注的是，M1型巨噬細胞外泌體具有與M1型巨噬細胞類似的膜結構，與未極化的巨噬細胞分泌的外泌體相比，具有更顯著的腫瘤靶向性。盡管如此，局部給藥后的載藥外泌體仍存在穩定性低和滯留性差等缺陷，阻礙了其作為局部緩釋載體的應用。

另一方面，水凝膠作為腫瘤局部遞藥載體具有獨特優勢：(1)獨特的三維網絡結構利于多種藥物的高效包載和緩控釋藥；(2)選用適宜凝膠材料可實現微創、良好的生物相容性和生物可降解特性；(3)腫瘤局部注射利于藥物的高腫瘤蓄積特性和低全身毒性。然而，基于腫瘤及腫瘤微環境的復雜特性，腫瘤局部遞藥水凝膠的設計仍面臨極大的挑戰，如凝膠在腫瘤區域的非響應釋藥，藥物從凝膠釋放后是否能進一步特異性靶向蓄積至腫瘤組織，凝膠材料的不可注射性、低腫瘤黏附性、無免疫增強活性等。

透明質酸為細胞基質的重要組分，具有優越的生物相容性和可降解性，特別地，透明質酸與腫瘤細胞高表達的CD₄₄受體具有較高親和力，具有一定腫瘤黏附性。申請號為201910145974.1的專利公開了一種負載外泌體的復合水凝膠及其制備方法，利用氧化透明質酸的醛基與乙二酸二酰肼的氨基交聯形成凝膠，但該凝膠未考慮在凝膠中外泌體的體內外穩定性及凝膠腫瘤黏附性的問題。

發明內容

發明目的：為解決上述技術問題，本發明提供了一種免疫增強型外泌體水凝膠復合物及其制備方法和應用，該水凝膠復合物為一種全新的化療+免疫增強劑組合方案，可克服載藥外泌體穩定性差、靶向效率低、滯留性弱等缺點及普通水凝膠腫瘤黏附性低、不可注射、非響應釋藥等缺點，提高藥物在腫瘤及腫瘤炎癥環境的有效蓄積濃度，降低全身毒副作用，發揮協同殺傷作用，對各類實體瘤均具有顯著的治療效果。

技術方案：為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種免疫增強型外泌體水凝膠復合物，所述復合物是由M1型巨噬細胞外泌體包載藥物形成藥物-M1型巨噬細胞外泌體，然后通過甘露聚糖肽和透明質酸的化學交聯形成水凝膠，將所述藥物-M1型巨噬細胞外泌體負載在所述水凝膠中，所形成的水凝膠遞藥系統。

作為優選，所述藥物選自阿霉素、紫杉醇、姜黃素、靈芝酸A、人參皂苷、槲皮素、紫草素或魚腥草素。

所述化學交聯是先將透明質酸氧化，然后與甘露聚糖肽在溶液中進行反應，使氧化透明質酸的醛基和甘露聚糖肽的氨基進行化學交聯，優選室溫反應15s-2min，進一步優選30s。

所述的免疫增強型外泌體水凝膠復合物的制備方法，包括以下步驟：

S1：M1型巨噬細胞外泌體的提取、純化；