[發(fā)明專利]一種利用番茄紅素操縱子合成生物感應(yīng)器的制備方法及其相應(yīng)生物感應(yīng)器和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110203472.7
• 申請日: 2021-02-24
• 公開（公告）號: CN112877342B
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊建明;李美潔;呂書喆;王兆寶
• 申請（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué);青島海軍食品與營養(yǎng)創(chuàng)新研究院（青島特種食品研究院）
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/70;C12N15/66;C12N1/21;G01N27/447;C12R1/19
• 代理公司: 青島合創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

1.一種利用番茄紅素操縱子合成生物感應(yīng)器的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

（1）擴增番茄紅素操縱子lyc基因片段，純化回收后，與pET28a質(zhì)粒同時利用EcoR I和Hind III雙酶切，然后將質(zhì)粒酶切片段與lyc基因片段以2:1的質(zhì)量比進行連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞，于含抗生素的LB 固體平板上篩選陽性克隆，得到重組質(zhì)粒pET-lyc；

所述番茄紅素操縱子lyc基因如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

（2）分別擴增重組質(zhì)粒pET-lyc和啟動子yqjF基因片段，純化回收后，將重組質(zhì)粒pET-lyc和啟動子yqjF基因片段以1:2的濃度比進行無縫連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞，于含抗生素的LB 固體平板上篩選陽性克隆，得到重組質(zhì)粒pET-yqjF-lyc；

所述啟動子yqjF基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

（3）將重組質(zhì)粒pET-yqjF-lyc、甲羥戊酸途徑上游表達載體和甲羥戊酸途徑下游表達載體共轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞，于含抗生素的LB固體平板上篩選到的陽性克隆，得到工程菌株XLYC1；

所述甲羥戊酸途徑上游表達載體能夠外源表達乙酰輔酶A酰基轉(zhuǎn)移酶/羥甲基戊二酰輔酶A還原酶基因mvaE和3-羥-3甲基戊二酰輔酶A合酶基因mvaS；

所述甲羥戊酸途徑下游表達載體能夠外源表達甲羥戊酸激酶基因ERG12，磷酸甲羥戊酸激酶基因ERG8，甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶基因ERG19和異戊烯焦磷酸異構(gòu)酶基因IDII；

（4）將工程菌株XLYC1于含氯霉素、氨芐青霉素和卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)活化，再轉(zhuǎn)接至M9培養(yǎng)基中培養(yǎng)至OD₆₀₀為0.6-0.8，加入IPTG誘導(dǎo)后，得到生物感應(yīng) 器。

2.權(quán)利要求1所述的利用番茄紅素操縱子合成生物感應(yīng)器的制備方法中獲得的生物感應(yīng)器。

3.權(quán)利要求2所述的生物感應(yīng)器在用于爆炸物分子的可視化檢測中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生物感應(yīng)器在用于爆炸物分子的可視化檢測中的應(yīng)用，其特征在于，所述生物感應(yīng)器的使用方法為：將生物感應(yīng)器培養(yǎng)活化后，加入待測樣品后進行共培養(yǎng)，肉眼觀察培養(yǎng)液顏色，紅色越明顯則待測樣品中爆炸物分子的濃度越高。

5.權(quán)利要求2所述的生物感應(yīng)器在用于制備提高爆炸物分子檢測可視度的生物制劑中的應(yīng)用。