[發明專利]一種外切褐藻膠裂解酶、其編碼基因及應用

有效

• 申請號: 202110202885.3
• 申請日: 2021-02-23
• 公開（公告）號: CN112831511B
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 邵宗澤;周梅先;陳琳
• 申請（專利權）人: 自然資源部第三海洋研究所
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N15/70;C12N15/66;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;游學明

1.一種表達外切褐藻膠裂解酶的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO ：1 所示。

2.一種表達外切褐藻膠裂解酶的基因，其特征在于，其由SEQ ID NO ：1所示的核苷酸序列去除其5’端57bp片段得到。

3.一種重組載體，其含有權利要求1或2所述的一種表達內切褐藻膠裂解酶的基因。

4.一種重組菌，其含有權利要求3所述的重組載體。

5.一種內切褐藻膠裂解酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO:2 所示。

6.一種內切褐藻膠裂解酶，其特征在于：其由SEQ ID NO:2 所示的氨基酸序列去除其N端19個氨基酸得到。

7.如權利要求5或6所述的內切褐藻膠裂解酶的用途，其用于褐藻利用和/或褐藻寡糖生產。

8.一種內切褐藻膠裂解酶的制備方法，包括如下步驟：

（1）獲取弧菌Vibrio sp. MCCC 1A13243 的基因組DNA作為模板，所述的模板含內切褐藻膠裂解酶基因VAL3；所述的內切褐藻膠裂解酶基因核苷酸序列如SEQ ID NO :1 所示；

（2）設計并合成擴增去除信號肽編碼序列的內切褐藻膠裂解酶基因VAL3的引物：

上游引物VAL3F: 5’-GATCACATATGTGTACCTCTACTTCTGCT-3’

下游引物VAL3R: 5’-GATCACTCGAGGCCTTCGTACTTGCTATG-3’；

（3）PCR擴增及重組質粒的構建：采用步驟（2）的引物以步驟（1）的基因組DNA為模板進行擴增；PCR產物經限制性內切酶NdeI和XhoI酶切后被連接到經同樣限制性內切酶酶切的表達載體pET-22b上，將連接產物轉化大腸桿菌Escherichia coli TOP10受體菌株，篩選含有內切褐藻膠裂解酶基因的重組質粒，并進行雙酶切和測序驗證；

（4）內切褐藻膠裂解酶的表達與純化：將含有內切褐藻膠裂解酶基因的重組質粒轉化入大腸桿菌E. coli BL21受體菌株，誘導內切褐藻膠裂解酶蛋白表達，并純化，獲得純化后的內切褐藻膠裂解酶。