[發明專利]一種腦梗死生物標志物及其應用

在審

• 申請號: 202110200547.6
• 申請日: 2021-02-23
• 公開（公告）號: CN113063718A
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 鐘望濤;馬曉瑭;張慧婷;許小冰
• 申請（專利權）人: 廣東醫科大學附屬醫院
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 潘俊達;王滔

本發明提供了一種腦梗死生物標記物及其應用，以血漿內皮細胞膜微粒為腦梗死生物標記物，可以有效作為評估腦梗死的生物標志物，為腦梗死的早期診斷及嚴重程度、亞型評估提供新方法，為接受rt?PA靜脈溶栓患者提供預后評估的指標。

技術領域

本發明涉及評估腦梗死技術領域，具體涉及一種腦梗死生物標志物及其應用。

背景技術

據2010年衛生部《中國衛生年鑒》數據統計顯示：腦卒中已成為我國國民第一位的疾病死亡原因。缺血性腦卒中(腦梗死)大約占80％，是腦卒中最常見的類型。腦梗死的早期診斷主要依賴于影像學，尤其頭部MR最早可在3h顯示出腦梗死病灶，但影像學檢查費用昂貴，很多基層醫院無法普及。其它生物標志物如白介素-6(IL-6)，基質金屬肽酶9(MMP-9)，C反應蛋白(CRP)已被報道在腦梗死中升高，具有作為腦梗死標志物的潛力。然而它們易受感染因素的影響，不足以在非腦梗死及腦梗死高危患者鑒別出真實的腦梗死，也不足以在腦梗死不同病程、不同亞型及嚴重程度之間進行準確的鑒別診斷。至今，仍缺乏有效的腦梗死生物標志物。

目前，有效治療急性腦梗死的手段主要是腦梗死發病后4.5小時內組織性纖維蛋白酶原激活劑(rt-PA)溶栓治療，及發病6小時內尿激酶靜脈注射的溶栓治療。此外，血管內治療及橋接治療開通堵塞的腦血管也是臨床應用中的熱點。然而，以上這些治療僅約10％急性腦梗死患者能獲益。一部分患者在嚴格時間窗內使用rt-PA靜脈溶栓后卻出現了無效再通、出血轉化、惡性腦水腫等并發癥。預知溶栓后患者的愈后情況對于進一步治療十分重要，目前仍缺乏有效的實驗室指標。

有鑒于此，進一步探究腦梗死的分子標志物及評估rt-PA療效的指標十分必要。

發明內容

本發明的目的之一在于：提供一種腦梗死生物標志物，可以有效作為評估腦梗死的生物標志物，為腦梗死的早期診斷及嚴重程度、亞型評估提供新方法，為接受rt-PA靜脈溶栓患者提供預后評估的指標。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種腦梗死生物標志物，所述標志物為血漿內皮細胞膜微粒(EMVs)。

優選的，所述血漿內皮細胞膜微粒的提取方法包括以下步驟：

S1、取出血漿置于無酶離心管中，按血漿：磷酸緩沖鹽溶液＝1:3的體積比將磷酸緩沖鹽溶液加入所述無酶離心管中混合，放入離心機中離心，離心后去除沉淀，得到去沉淀血漿；

S2、將步驟S1中得到的去沉淀血漿再次離心，離心后去掉上清液，再次加入磷酸緩沖鹽溶液混合均勻，得到預混合液；

S3、將內皮標記物CD105偶聯的生物素加入所述預混合液中，4℃放置2h，得到血漿內皮細胞膜微粒。

優選的，步驟S1中，離心條件為：先在轉速300g/min下運行5min，然后在轉速2000g/min下運行20min，離心溫度為4℃。

優選的，步驟S2中，離心條件為：在轉速20000g/min下運行70min，離心溫度為4℃。

優選的，所述血漿內皮細胞膜微粒的分選方法包括以下步驟：

S1、將抗生物素多分選微珠加入得到的血漿內皮細胞膜微粒中，4℃放置15min，得到第一分選液；

S2、向所述第一分選液中加入磷酸緩沖鹽溶液，置于磁力架上，時間大于或等于8h；然后置于4℃下，去除上清液，得到微粒磁珠沉淀，再次加入磷酸緩沖鹽溶液重懸；得到第二分選液；

S3、將多分選釋放試劑加入所述第二分選液，混合均勻，4℃放置10min，得到第三分選液；

S4、將磷酸緩沖鹽溶液加入所述第三分選液中，置于磁力架上，時間大于或等于8h；然后置于4℃下，再加入內皮標志物CD144，4℃放置時間大于或等于8h，得到第二分選液；