[發(fā)明專利]一種利用基因編輯雞生物反應(yīng)器表達(dá)的重組曲妥珠單抗及應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110198516.1 | 申請(qǐng)日： | 2021-02-22 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN112961865B | 公開（公告）日： | 2023-06-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 唐小川;梁晶晶;魏姣;梁瑞益 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 廣西大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/13 | 分類號(hào)： | C12N15/13;C12N15/861;C12N15/113;C12N15/89;C07K16/28 |
| 代理公司： | 廣西南寧公平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 45104 | 代理人： | 黃永校 |
| 地址： | 530004 廣西壯族*** | 國(guó)省代碼： | 廣西;45 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 基因 編輯 生物反應(yīng)器 表達(dá) 組曲 妥珠單抗 應(yīng)用 | ||
1.一種利用基因編輯雞生物反應(yīng)器表達(dá)的重組曲妥珠單抗基因，其特征在于，其核苷酸序列如序列表No.?1?所示。
2.權(quán)利要求1?所述基因編碼的兩段蛋白質(zhì)，其特征在于，其氨基酸序列如序列表No.2和No.3所示，并通過如下步驟獲取：
（1）腺病毒載體包裝：將定點(diǎn)敲入載體以及包含CRISPR/Cas9基因編輯工具的序列的載體包裝成高感染能力的腺病毒載體，其滴度不低于1×1010?PFU/mL，腺病毒敲入載體中包含的重組曲妥珠單抗序列中包含2A連接肽序列和雞溶解酶信號(hào)肽序列，腺病毒CRISPR/Cas9載體所對(duì)應(yīng)的基因編輯位點(diǎn)位于雞卵清蛋白基因第二外顯子上，其位點(diǎn)的序列如序列表No.4所示。
（2）雞胚顯微注射：將上述腺病毒載體通過顯微注射技術(shù)注射到孵化了2.5天的雞胚血管中，將雞胚繼續(xù)孵化至出殼，飼養(yǎng)至性成熟；
（3）重組曲妥珠單抗?jié)舛燃盎钚詸z測(cè)：將上述成功定點(diǎn)敲入的基因編輯雞大量飼養(yǎng)和擴(kuò)繁，公雞留做種雞，母雞收集其雞蛋，分離其蛋清進(jìn)行重組曲妥珠單抗?jié)舛燃盎钚詸z測(cè)，檢測(cè)為陽(yáng)性的蛋清經(jīng)純化即可獲得目標(biāo)蛋白。
3.權(quán)利要求2?所述的蛋白質(zhì)在制備乳腺癌治療藥物中的應(yīng)用。
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