[發明專利]一種Serpine2基因小鼠模型構建方法與應用在審

申請號：	202110198446.X	申請日：	2021-02-20
公開（公告）號：	CN112813026A	公開（公告）日：	2021-05-18
發明（設計）人：	柴人杰;陳蔚;張莎莎;程誠;高下	申請（專利權）人：	東南大學
主分類號：	C12N5/0797	分類號：	C12N5/0797;C12N5/071;C12N15/12;A01K67/027
代理公司：	北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357	代理人：	饒富春
地址：	210024 江蘇省***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種 serpine2 基因小鼠模型構建方法應用
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【說明書】：

本發明公開了一種Serpine2基因小鼠模型構建方法與應用，屬于生物技術領域。一種Serpine2基因小鼠模型構建方法，包括以下步驟：培養初代OC細胞；通過siRNA敲減所述OC細胞中的Serpine2基因；取新生Lgr5?EGFP小鼠耳蝸，放入培養液中培養，并消化成單細胞；從含有Lgr5?EGFP細胞的單細胞懸液中分選出Lgr5+細胞；用所述siRNA敲除Lgr5+細胞中的Serpine2基因；培養Serpine2基因敲減的Lgr5+細胞，掃描電子顯微鏡觀察并記錄成球細胞的數量和直徑；培養第一代所述成球細胞，用EdU染色以及DAPI、Myo7a抗體標記染色，觀察毛細胞分化的情況。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種Serpine2基因小鼠模型構建方法與應用。

背景技術

聽力殘疾是個全球性的醫學問題，此類患者占全球人口的7％-10％。聽力下降隨著年齡的老化而增多，我國老年性耳聾患者已經超過5000萬人，并隨著人口老齡化而日益增多。

感音性神經耳聾時內耳、耳蝸神經、腦干聽覺通路及聽覺中樞病變導致的聽力下降的統稱。據相關統計數據顯示，我國絕大多數聽力障礙患者均為感音性耳聾。感音性耳聾常見的病因多為耳蝸和耳蝸后等部位出現病變。耳蝸毛細胞的修復已成為重要的研究課題，相應地，提供一種非人動物模型作為該課題的研究平臺，也同樣具有重要意義。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提出了一種Foxg1和Serpine2基因小鼠構建方法與應用。

本發明的目的可以通過以下技術方案實現：

一種Serpine2基因小鼠模型構建方法，包括以下步驟：

培養初代OC細胞；

通過siRNA敲減所述OC細胞中的Serpine2基因；

取新生Lgr5-EGFP小鼠耳蝸，放入培養液中培養，并消化成單細胞；從含有Lgr5-EGFP細胞的單細胞懸液中分選出Lgr5+細胞；用所述siRNA敲除Lgr5+細胞中的Serpine2基因；

培養Serpine2基因敲減的Lgr5+細胞，掃描電子顯微鏡觀察并記錄成球細胞的數量和直徑；

培養第一代所述成球細胞，用EdU染色以及DAPI、Myo7a抗體標記染色，觀察毛細胞分化的情況。

可選地，所述培養液中含有DMEM/F12、B27、N2、IGF、EGF、b-FGF、肝素與氨芐青霉素。

可選地，通過流式細胞分選法分選出Lgr5+細胞。

可選地，通過RT-qPCR技術檢測所述初代OC細胞中的Serpine2基因的敲減效率。