[發明專利]一種促進干細胞細胞因子產量的生產方法

有效

• 申請號: 202110197400.6
• 申請日: 2021-02-22
• 公開（公告）號: CN112920994B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 張海濤;李娜
• 申請（專利權）人: 上海天安智谷干細胞科技集團有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/077;C07K16/22;C12P21/02;C07K14/475;C07K14/515
• 代理公司: 南京中高專利代理有限公司 32333
• 代理人: 盧丹丹

本發明涉及一種促進干細胞細胞因子產量的生產方法，該方法使用了能夠特異性針對PTN的單克隆抗體，所述抗體能夠有效的誘導骨髓間充質干細胞成脂分化，并且在分化后能夠高效的促進SCF和VEGF細胞因子高分泌，通過分離純化含有所述高產量的細胞因子可以用于后續的研究。

技術領域

本申請涉及生物領域，更具體的，涉及一種一種促進干細胞細胞因子產量的 生產方法。

背景技術

間充質干細胞(MSCs)是干細胞家族的重要成員，不僅存在于骨髓、脂肪、臍 血和外周血中，還存在于軟骨膜、骨膜、肌肉及骨小梁中。目前研究較多的是骨 髓間充質干細胞(BMSCs)。其基本特性有：自我更新能力，在體內可增殖形成組 織并維持自身的數量，在體外可克隆生長。增殖分化能力，在一定環境和特定因 子的誘導下，可以分化為肌肉、神經、軟骨、骨、脂肪、肌腱及韌帶等組織。由 于BMSCs具有可多向分化、體外擴增能力強、來源廣泛、取材方便、對機體損傷 小等優點，已成為骨組織工程研究目前最常用的種子細胞。其在體外分化需要適 宜的培養條件或誘導劑，相關生長因子可以促進其增殖與分化，并依賴于細胞因 子的調節。

骨質疏松癥是以骨量減少、骨的微觀結構退化為特征，致使骨的脆性增加以 致易于發生骨折的一種全身性骨骼疾病。骨組織中成骨細胞和破骨細胞的功能失 衡是導致骨質疏松癥的主要病因。現已證實，骨髓腔內的脂肪細胞增加與骨形成 能力下降存在密切的聯系。而且骨髓腔內的脂肪細胞和成骨細胞均來源于骨髓間 充質干細胞，兩者具有相同的細胞表型，在一定條件下可以互相轉換，并且存在 此消彼長的關系。而骨質疏松癥可能是骨髓間充質干細胞分化失衡后過多地向脂 肪細胞分化所致。因此，通過抑制骨髓間充質干細胞向成脂方向分化來防治骨質 疏松癥很值得我們研究。現階段骨質疏松癥治療藥物主要是針對破骨細胞和成骨 細胞而研制，雖然對骨質疏松癥有一定療效，但存在不良反應大及患者不能長期 耐受等缺點。迄今為止，還沒有一種安全有效的藥物幫助已疏松的骨骼恢復原狀。 因此，研究骨髓間充質干細胞在轉化為成脂過程中的某些重要影響因素，可為骨質疏松癥的發病機制研究及藥物篩選提供一定基礎。長期研究發現，雌激素、維 生素D3、PPARS等細胞核激素受體可影響骨髓間充質干細胞向成脂方向分化。因 此，研究骨髓間充質干細胞的成脂分化時目前重要的研究方向。

此外，骨髓間充質干細胞能夠合成并分泌多種細胞因子，如表皮生長因子、 堿性成纖維細胞生長因子、血小板生長因子、血管內皮生長因子、轉化生長因子、 肝細胞生長因子、白介素6等。這些因子在干細胞成脂分化過程中的表達各不相 同。此前研究表明，黃芪甲甙與MSCs共培養后，MSCs的增殖指數明顯增加，黃芪 甲甙促進MSCs增殖呈時間依賴性，但當達到一定的藥物濃度后，增殖指數將不再 增加。通過檢測SCF、TPO、GM—CSF、TGF的表達發現，加入黃芪甲甙后SCF的表 達較對照組明顯增高，其他細胞因子的表達差異無統計學意義，亦未見IL-3mRNA 的表達，因此，黃芪甲甙可以誘導和促進MSCs分泌SCF。該方法，可以用于特定 的SCF的生產和富集，用于后續的治療用途。

然而在現有技術中，還沒有驗證促進骨髓間充質干細胞快速增殖后成脂分 化，檢測相應細胞因子的變化情況，更沒有涉及相應的細胞因子的生產和富集的 研究。

發明內容

本發明針對現有技術的缺陷，提供了一種改進的促進細胞因子分泌的方法， 特別是高表達的SCF和VEGF細胞因子。

本發明一方面，提供一種特異性針對PTN的單克隆抗體，所述單克隆抗體的輕 鏈可變區的序列為(SEQ ID NO：1)，重鏈可變區的序列為(SEQ ID NO：2)。

本發明更進一步的，提供所述改進的針對PTN的單克隆抗體，所述改進為保守 修飾或者保守修飾的變體。