[發(fā)明專利]多酶恒溫擴增檢測試劑盒及其應用

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• 申請日: 2021-02-19
• 公開（公告）號: CN112831605A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發(fā)明（設計）人: 姚航平;陳喆;梁利國;陳杭;蔣凱
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州寶臨生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 劉桐亞

本發(fā)明提供了一種多酶恒溫擴增檢測試劑盒及其應用，涉及生物醫(yī)學檢測技術(shù)領域。所述試劑盒包括用于檢測甲型流感病毒H1N1的引物探針組、用于檢測甲型流感病毒H3N2的引物探針組、用于檢測甲型流感病毒H5N1的引物探針組、用于檢測乙型流感病毒IVB的引物探針組和用于檢測新型冠狀病毒SARS?CoV?2的引物探針組中的至少一種。上述多酶恒溫擴增檢測試劑盒能夠特異性的對甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠狀病毒進行檢測，相對于現(xiàn)有的熒光定量PCR檢測法具有準確率高、檢測速度快的優(yōu)勢。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學檢測技術(shù)領域，尤其是涉及一種多酶恒溫擴增檢測試劑盒及其應用。

背景技術(shù)

多重酶恒溫擴增(Multi-Enzyme Isothermal Amplification,MIA)其原理為重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應形成并啟動DNA合成，對模板上的目標區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非常快，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。

流感是由流感病毒引起的一種急性病毒性呼吸道感染，傳染性強，發(fā)病率高，其中甲型流感病毒的流行性比乙型流感病毒更強，癥狀更嚴重。新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)是2019年在人體中發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒新毒株。該病毒引起的癥狀一般為發(fā)熱、乏力、干咳、逐漸出現(xiàn)呼吸困難，嚴重者表現(xiàn)為急性呼吸窘迫綜合征，膿毒癥休克，難以糾正的代謝性酸中毒和凝血功能障礙。該病毒存在人傳人現(xiàn)象，病毒潛伏期一般為1～14天，潛伏期具有傳染性。

在成年人和兒童中，發(fā)熱伴呼吸道癥候群是最普遍的急性傳染病，對于患者和公共衛(wèi)生部門來說，核酸檢測仍然是確診的第一選擇方案，此外還有病毒分離及鑒定與病例的血清學檢測的血凝及抑制試驗(HAI)、微量中和實驗，但由于人體產(chǎn)生抗體都處于病情發(fā)展的中后期，早期隱形攜帶者無法通過抗體檢測診斷篩選，而病毒的分離需要3-5天才能得到培養(yǎng)結(jié)果，于到病毒后的3-5天后才完成流感病毒鑒定結(jié)果，所以這些方法一般只能作為核酸檢測以外的輔助檢測手段。在臨床上，由于時間有限，而且如若耽誤病人導致病情惡化或放縱其傳播，將造成嚴重后果。

熒光定量PCR是現(xiàn)階段檢測多種呼吸道病毒的優(yōu)選方案，但其存在以下局限性：(1)易氣溶膠污染導致假陽性，需配備經(jīng)專業(yè)培訓并執(zhí)PCR上崗證技術(shù)人員、專業(yè)PCR認證實驗室和價格高昂的分析設備；(2)傳統(tǒng)熒光定量PCR樣本核酸提取和擴增檢測分兩步驟進行，從取樣到檢測結(jié)果至少需要3小時以上。

因此，研究開發(fā)出一種基于恒溫擴增的MIA檢測方法，該方法具有準確率高、檢測速度快，能夠特異性的對甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠狀病毒進行檢測的多酶恒溫擴增檢測試劑盒，變得十分必要和迫切。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種基于恒溫擴增的MIA檢測方法和試劑盒，該方法具有準確率高、檢測速度快的優(yōu)勢，能夠特異性的對甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠狀病毒進行檢測。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供的多酶恒溫擴增檢測試劑盒，所述試劑盒包括用于檢測甲型流感病毒H1N1的引物探針組；

和/或，用于檢測甲型流感病毒H3N2的引物探針組；

和/或，用于檢測甲型流感病毒H5N1的引物探針組；

和/或，用于檢測乙型流感病毒IVB的引物探針組；

和/或，用于檢測新型冠狀病毒SARS-CoV-2的引物探針組。