[發明專利]一種氨基末端腦尿鈉肽檢測方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202110192561.6
• 申請日: 2021-02-20
• 公開（公告）號: CN112986586A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 劉春艷;崔琪瑤;鄧盛花
• 申請（專利權）人: 廣東菲鵬生物有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/68;C07K16/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種氨基末端腦尿鈉肽檢測方法和試劑盒，采用雙抗體夾心法檢測氨基末端腦尿鈉肽的含量；采用本發明的氨基末端腦尿鈉肽檢測方法和試劑盒，可以有效提高檢測的特異性和/或檢出率。

技術領域

本發明涉及蛋白檢測領域。具體而言，本發明涉及氨基末端腦尿鈉肽的檢測方法和試劑盒。

背景技術

心力衰竭(心衰)是各種心臟疾病的嚴重和終末階段，臨床上主要表現為呼吸困難、乏力以及液體潴留等。據統計，我國目前心衰患病估計已達1.3％左右，現癥患者約1000萬，中國已成為世界上擁有最大心衰病患群體的國家。由于心血管疾病的可預防控制性，早期診斷至關重要。

血清標志物檢測是臨床上心衰早期診斷和預后判斷的重要手段之一。其中包括腦尿鈉肽(BNP)和氨基末端腦尿鈉肽(NT-proBNP)，是國內外(ECS/ACC/AHA/HFSA/CSC)心力衰竭指南均推薦的心力衰竭首選血清標志物。

相比于BNP，NT-proBNP的半衰期更長、穩定性更好，因此NT-proBNP在檢測早期或輕度心衰時的敏感度更高，更適用于臨床應用。

發明內容

發明人經過大量理論研究和實驗摸索，充分考慮氨基末端腦尿鈉肽的結構特性，對各種待測NT-proBNP抗原區間和檢測抗體進行分析研究，獲得了能夠用于氨基末端腦尿鈉肽檢測的氨基末端腦尿鈉肽抗原區域組合。

在一些實施方案中，本發明可以包括下述一項或多項：

1.一種氨基末端腦尿鈉肽檢測試劑盒，其包括用于檢測氨基末端腦尿鈉肽的第一抗體和第二抗體，其中，第一抗體結合氨基末端腦尿鈉肽的第27-31位氨基酸片段；第二片段結合氨基末端腦尿鈉肽的第42-46位氨基酸片段。

2.項目1所述的試劑盒，第一抗體為標記抗體時第二抗體為包被抗體；或第二抗體為標記抗體時第一抗體為包被抗體。

3.項目1所述的試劑盒，進一步包括檢測氨基末端腦尿鈉肽的第三抗體，所述第三抗體結合氨基末端腦尿鈉肽的第13-27位氨基酸片段；

例如用于配對的抗體分為第一組抗體和第二組抗體，其中第一組抗體和第二組抗體選自下組：

1)第一組抗體包括第一抗體，并且第二組抗體包括第二抗體和第三抗體；

2)第一組抗體包括第二抗體，并且第二組抗體包括第一抗體和第三抗體；

3)第一組抗體包括第三抗體，并且第二組抗體包括第一抗體和第二抗體。

4.項目1-3任一項所述的試劑盒，其中所述抗體的反應性為ELISA評價OD₄₀₅≥0.5。

5.項目1-4任一項所述的試劑盒，其中所述標記抗體用可檢測標記物和/或結合配偶體標記，可檢測標記物例如金屬粒子，熒光標記，發色團標記，電子致密標記，化學發光標記，放射性標記，或酶標記；例如可以是羅丹明，熒光素，熒光微球，膠體金，吖啶酯，熒光素酶，辣根過氧化物酶，堿性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖氧化酶，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶或葡萄糖-6-磷酸脫氫酶標記；結合配偶體例如是生物素/抗生物素蛋白，生物素/鏈霉抗生物素蛋白；例如標記抗體通過結合配偶體與可檢測標記物進行標記。

6.項目1-5任一項所述的試劑盒，其中所述包被抗體連接至固相和/或結合配偶體，固相例如是磁性顆粒，膠乳粒子、微量滴定板、硝酸纖維素膜或微流控芯片；結合配偶體例如是生物素/抗生物素蛋白，生物素/鏈霉抗生物素蛋白；例如包被抗體通過結合配偶體與固相進行連接。

7.檢測氨基末端腦尿鈉肽的抗體組合，包括第一抗體和第二抗體；任選地，還包括第三抗體；其中第一抗體、第二抗體、第三抗體根據項目1-6中任一項所定義。

8.項目7所述的抗體組合在制備檢測氨基末端腦尿鈉肽的試劑盒中的用途。