[發明專利]一種三黃顆粒的檢測方法

在審

• 申請號: 202110192117.4
• 申請日: 2021-02-19
• 公開（公告）號: CN113030364A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 吳磊;陸超;姚昶;王江濤;戴國梁
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫院
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N30/95
• 代理公司: 合肥昕華匯聯專利代理事務所(普通合伙) 34176
• 代理人: 崔雅麗

1.一種三黃顆粒的檢測方法，其特征在于，具體步驟如下：

S1,分別取三黃顆粒并且對三黃顆粒中的炙黃芪、熟大黃和姜黃進行了薄層色譜鑒別試驗；

S2,分別對三黃顆粒中的炙黃芪、熟大黃和姜黃薄層方法，不同溫度、不同濕度、不同廠家薄層板、不同點樣量和不同展開劑展開效果的耐用性檢測；

S3,對熟大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量測定。

2.根據權利要求1所述的一種三黃顆粒的檢測方法，其特征在于：所述S1中三黃顆粒中的炙黃芪薄層色譜鑒別試驗具體步驟如下：

1)取三黃顆粒18g,以30ml水溶解后，用水飽和正丁醇溶液振搖提取4次，每次30mL。合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次30mL，棄去氨液。正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。取缺炙黃芪制劑，同法制得炙黃芪陰性溶液；

2)另取炙黃芪對照藥材粉末3g，加甲醇40mL，加熱回流1小時，過濾，濾液蒸干，殘渣加水25mL使溶解，自“用水飽和正丁醇溶液振搖提取4次”起，按供試品溶液制備方法，即得黃芪對照藥材溶液；

3)照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》四部通則0502)試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)的下層溶液為展開劑展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液顯色，在105℃加熱直至斑點顯色清晰，供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上，日光下顯相同顏色的斑點，陰性未見干擾。

3.根據權利要求1所述的一種三黃顆粒的檢測方法，其特征在于：所述S1中三黃顆粒中的熟大黃薄層色譜鑒別試驗具體步驟如下：

1)取三黃顆粒18g,以30ml水溶解后，加鹽酸6mL，加熱回流30分鐘，冷卻。用乙醚振搖提取2次，每次20mL。乙醚層揮干，殘渣加三氯甲烷1mL使溶解，作為供試品溶液。取缺熟大黃制劑，同法制得熟大黃陰性溶液；

2)另取大黃對照藥材粉末0.5g，加甲醇20mL，超聲30分鐘，濾過，取濾液5mL蒸干，殘渣加水20mL使溶解，按供試品溶液制備方法，自“加鹽酸2mL，加熱回流30分鐘”起，按供試品溶液制備方法，即得大黃對照藥材溶液；

3)照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》四部通則0502)試驗，吸取上述3種溶液各10μL，分別點于硅膠H薄層板上，以石油醚(30-60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上，熒光下顯相同顏色的斑點，陰性未見干擾。

4.根據權利要求1所述的一種三黃顆粒的檢測方法，其特征在于：所述S1中三黃顆粒中的姜黃薄層色譜鑒別試驗具體步驟如下：

1)取三黃顆粒18g,以30ml水溶解后，用乙醚振搖提取3次，每次30mL。乙醚層揮干，殘渣加無水乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。取缺姜黃制劑，同法制得姜黃陰性溶液；

2)另取姜黃對照藥材0.5g，加無水乙醇20mL，超聲30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1mL使溶解，作為姜黃對照藥材溶液；

3)照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》四部通則0502)試驗，吸取上述3種溶液各2μL，分別點于硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(96:4:0.7)為展開劑展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上，熒光下顯相同顏色的斑點，陰性未見干擾。

5.根據權利要求1所述的一種三黃顆粒的檢測方法，其特征在于：所述S3中：對熟大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量測定具體步驟如下；

1)色譜條件：HederaC18 ODS-2色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)；以甲醇-0.1％磷酸水(80:20)為流動相，檢測波長為254nm，柱溫：30℃；流速：1.0mL·min-1；

2)對照品溶液的制備：取五氧化二磷減壓干燥12h的大黃素、大黃酸、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品適量，置量瓶中，精密稱定，加甲醇制成含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚質量濃度分別為108.9、115、119、119、56.8μg·mL-1的混合標準品溶液；

3)供試品溶液的制備：取三黃顆粒18g,以30ml水溶解后，精密量取2mL置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL和鹽酸1.5mL，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，精密稱定，加甲醇補足減失的重量，濾過，精密量取續濾液15mL，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，并轉移至10mL量瓶中，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)20min，加甲醇定容至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，即得；

4)陰性溶液的制備：取缺制大黃陰性溶液2mL置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL和鹽酸1.5mL，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，精密稱定，加甲醇補足減失的重量，濾過，精密量取續濾液15mL，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，并轉移至10mL量瓶中，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)20min，加甲醇定容至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，即得；

5)系統適應性試驗：分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，供試品色譜與對照品色譜在相同的位置有較大吸收，陰性對照無干擾，理論板數按大黃素峰計算不低于3000；

6)標準曲線的繪制：取上述對照品溶液，用甲醇分別稀釋至含蘆薈大黃素、含大黃酸、含大黃素、含大黃酚、含大黃素甲醚的對照品溶液，分別精密吸取各不同濃度的對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀中測定，經線性回歸，得蘆薈大黃素回歸方程Y＝43425X-604.2(r＝0.999 7)；大黃酸回歸方程Y＝29807X+25068(r＝0.9994)；大黃素回歸方程Y＝33759X-19695(r＝0.999 7)；大黃酚回歸方程Y＝33850X-73616(r＝0.999 9)；大黃素甲醚回歸方程Y＝27084X-1237.7(r＝0.999 8)；蘆薈大黃素在6.37～108.9μg·mL-1范圍內，大黃酸在6.73～115μg·mL-1范圍內，大黃素在6.96～119μg·mL-1范圍內，大黃酚在6.96～119μg·mL-1范圍內，大黃素甲醚在3.32～56.8μg·mL-1范圍內，與峰面積的積分值呈良好的線性關系；

7)精密度試驗：取同一對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀中，重復測定6次，以峰面積積分值計算；

8)重復性試驗：精密量取三批三黃合劑各2mL，按上述要求操作，平行制備供試品溶液6份，分別測定并記錄峰面積；

9)穩定性試驗：取同一供試品溶液，按上述色譜條件，于0、2、4、6、8、12h分別進樣，測定色譜峰面積，分別以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量計算；

10)加樣回收試驗：精密量取三黃顆粒6份，各1mL，分別加入高、中、低三種濃度的混標溶液，混勻，按照上述要求制備供試品溶液，以上述色譜條件，測定，記錄峰面積，計算加樣回收率；

11)樣品含量測定：取3個批次的三黃顆粒，每批兩份，精密量取2mL，按上述要求制備供試品溶液，按上述色譜條件，進樣10μL，測定，計算。