[發明專利]大豆皺葉癥抗性鑒定的KASP分子標記及應用有效
| 申請號： | 202110192017.1 | 申請日： | 2021-02-19 |
| 公開（公告）號： | CN113186324B | 公開（公告）日： | 2022-07-12 |
| 發明（設計）人： | 陳文杰;陳淵;梁江;郭小紅;湯復躍;韋清源 | 申請（專利權）人： | 廣西壯族自治區農業科學院 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南寧東之智專利代理有限公司 45128 | 代理人： | 嚴涓逢;汪治興 |
| 地址： | 530007 廣西*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 大豆 皺葉癥 抗性 鑒定 kasp 分子 標記 應用 | ||
1.大豆皺葉癥抗性鑒定的KASP分子標記引物，其特征在于，所述KASP分子標記引物序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
2.大豆皺葉癥抗性的基因分型方法，其特征在于，提取大豆基因組DNA，用SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的KASP標記引物對提取的基因組DNA進行PCR擴增。
3.根據權利要求2所述的大豆皺葉癥抗性的基因分型方法，其特征在于，所述PCR擴增方法為：
PCR反應體系：DNA 2.5μL、KASP引物混合物 0.07μL、2×KASP Master mix 2.5μL；
PCR反應程序：94℃預變性15 min；94℃變性20 s，61-55℃梯度PCR ，每循環降低0.6℃，共10個循環；94℃變性20 s，55℃復性及擴增60 s，共26個循環；
所述的KASP引物混合物包括FAM上游引物、HEX上游引物、通用下游引物和純水。
4.根據權利要求3所述的大豆皺葉癥抗性的基因分型方法，其特征在于，所述KASP引物混合物由濃度均為100μM的FAM上游引物、HEX上游引物、通用下游引物與純水按6:6:15:23體積比混合而成。
5.如權利要求1所述的大豆皺葉癥抗性鑒定的KASP分子標記引物在大豆皺葉癥抗性鑒定中的應用。
6.根據權利要求5所述的KASP分子標記在大豆皺葉癥抗性鑒定中的應用，其特征在于，所述鑒定方法如下：
(1)獲得待測樣品基因組DNA；
(2)以基因組DNA為模板，利用權利要求1所述的KASP分子標記引物進行競爭性等位基因特異性PCR反應擴增；
(3)PCR反應結束后，收集每個反應孔產生的熒光信號，根據熒光信號的類型判斷分子標記的基因型，進而鑒定出待鑒定個體的皺葉癥抗性。
7.一種大豆皺葉癥抗性檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的大豆皺葉癥抗性鑒定的KASP分子標記引物。
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