[發明專利]第二鏈引導

在審

• 申請號: 202110190675.7
• 申請日: 2017-08-03
• 公開（公告）號: CN113151423A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: R·雷伯弗斯基;J·阿格雷絲迪
• 申請（專利權）人: 生物輻射實驗室股份有限公司;生物輻射歐洲有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳揚揚;陶家蓉

1.一種對測序平臺特異性cDNA擴增子測序的方法，包括：

-提供測序平臺特異性擴增子，其中所述測序平臺特異性擴增子包含雙鏈多核苷酸，所述雙鏈多核苷酸包含：

i)包含SEQ ID NO：1的第一末端；

ii)包含SEQ ID NO：2的第二末端；和

iii)包含雙鏈cDNA多核苷酸的中間區域，所述雙鏈eDNA多核苷酸包含與mRNA序列互補的第一鏈cDNA多核苷酸，所述第一鏈cDNA多核苷酸與對應于所述mRNA序列的第二鏈cDNA多核苷酸雜交；并且

-用含有SEQ ID NO：8的第二測序引物從第二末端對擴增子測序。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述第一末端包含第二鏈cDNA多核苷酸的3′聚腺苷酸區域，所述3′聚腺苷酸區域對應于mRNA序列的3′聚腺苷酸化區域。

3.如權利要求2所述的方法，其中所述第二鏈eDNA多核苷酸的長度小于相應mRNA長度的90％。

4.如權利要求1所述的方法，其中所述方法包括用第一測序引物從第一末端對擴增子進行測序，然后用第二測序引物從第二末端對擴增子進行測序。

5.如權利要求4所述的方法，其中所述第一測序引物自5′至3′包含GCCTGTCCGCGGAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC(SEQ ID NO：9)或自5′至3′包含ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT(SEQ ID NO：12)的序列。

6.如權利要求1所述的方法，其中所述第二測序引物自5′至3′包含AGATGTGTATAAGAGACAG(SEQ ID NO：10)。

7.如權利要求1所述的方法，其中所述第二測序引物自5′至3′包含TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG(SEQ ID NO：11)。

8.一種對多個測序平臺特異性cDNA擴增子測序的方法，包括：

-提供多個測序平臺特異性擴增子，其中單獨測序平臺特異性擴增子包含雙鏈多核苷酸，所述雙鏈多核苷酸包含：

i)包含SEQ ID NO：1的第一末端；

ii)包含SEQ ID NO：2的第二末端；和

iii)包含雙鏈cDNA多核苷酸的中間區域，所述雙鏈cDNA多核苷酸包含與mRNA序列互補的第一鏈cDNA多核苷酸，所述第一鏈cDNA多核苷酸與對應于所述mRNA序列的第二鏈cDNA多核苷酸雜交；

-用含有SEQ ID NO：8的第二測序引物從第二末端對擴增子的部分測序；并且

-用自5′至3′含有GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG(SEQ ID NO：12)的第三測序引物從第二末端對擴增子的部分測序。

9.如權利要求8所述的方法，其中所述第二測序引物包含SEQ ID NO：11。

10.一種包含5′末端和3′末端的引物，其中：

所述5′末端包含SEQ ID NO：2，且所述3′末端包含SEQ ID NO：8；或

所述5′末端包含SEQ ID NO：1，且所述3′末端包含SEQ ID NO：7。

11.如權利要求10所述的引物，其中所述5′末端包含SEQ ID NO：2，且所述3′末端包含SEQ ID NO：8。

12.如權利要求10所述的引物，其中所述引物包含SEQ ID NO：4。

13.如權利要求10所述的引物，其中所述5′末端包含SEQ ID NO：1，且所述3′末端包含SEQ ID NO：7。