[發(fā)明專利]一個兼抗黃瓜花葉病毒和煙草脈帶花葉病毒的雙價弱毒疫苗

在審

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• 申請日: 2021-02-11
• 公開（公告）號: CN112877301A
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 原雪峰;劉珊珊;葛玉倩;于成明
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N7/04;C12N15/84;C12N15/66;A01N63/40;A01N63/60;A01P1/00;C12R1/94
• 代理公司: 濟(jì)南譽(yù)豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37240
• 代理人: 薛鵬喜

本發(fā)明公開了一種兼抗黃瓜花葉病毒和煙草脈帶花葉病毒的雙價弱毒疫苗，所述雙價弱毒疫苗含有CMV_Fny分離物的突變型RNA2；所述CMV_Fny分離物的突變型RNA2是在CMV_Fny分離物的RNA2全長序列第2661位之后插入TAATAG以及一段煙草脈帶花葉病毒的保守序列；所插入的煙草脈帶花葉病毒的保守序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CMV_Fny分離物的突變型RNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。將本發(fā)明的雙價弱毒疫苗與含有CMV_Fny分離物RNA1和RNA3的質(zhì)粒混合接種，可以預(yù)防黃瓜花葉病毒和煙草脈帶花葉病毒的危害，為田間防治CMV和TVBMV引起的植物病毒病提供了疫苗材料和有效防治措施。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物病毒學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一個兼抗黃瓜花葉病毒和煙草脈帶花葉病毒的雙價弱毒疫苗及其在防治黃瓜花葉病毒和煙草脈帶花葉病毒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

煙草病毒病是全世界煙草栽培地區(qū)普遍發(fā)生的一類侵染性病害，具有種類多、分布廣的特點(diǎn)，煙草病毒侵染煙草后，能夠使煙株光合作用下降，煙株葉片畸形甚至停止生長。據(jù)調(diào)查，每年我國因煙草病毒病造成的煙葉損失達(dá)20％以上，嚴(yán)重者甚至整塊煙田絕收，給煙草生產(chǎn)造成巨大損失。復(fù)合侵染是煙草病毒病的發(fā)病特點(diǎn)，兩種或多種病毒復(fù)合侵染成為病毒危害的主要方式，癥狀更加復(fù)雜與嚴(yán)重，使診斷和防治更加困難。單獨(dú)防治一種病害往往效果不好，因此，設(shè)計(jì)能夠同時抗多種病毒的策略尤為重要。

黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)屬于雀麥花葉病毒科(Bormoviridae)黃瓜花葉病毒屬(Cuucmovirus)，是目前已知的寄主范圍最廣的植物病毒之一，可侵染100多科1200多種植物(Mochizuki et al.,2012)。主要通過蚜蟲以非持久性方式進(jìn)行傳播，還可以通過機(jī)械摩擦、種子、寄生植物進(jìn)行傳毒(Chaudhry et al.,1998)。在我國各大煙區(qū)，CMV發(fā)生普遍，在煙草的整個生育期均可侵染，通常苗期侵染，生長中期達(dá)到發(fā)病高峰。CMV是造成煙草花葉的主要病原，造成植株矮化和畸形嚴(yán)重，葉片出現(xiàn)花葉和壞死，也有黃綠相間的斑駁，嚴(yán)重時葉片變薄，嚴(yán)重影響煙草的質(zhì)量與產(chǎn)量。煙草脈帶花葉病毒(Tobacco vein banding mosaic virus，TVBMV)屬于馬鈴薯Y病毒科(Potyviridae)中的馬鈴薯Y病毒屬(Potyvirus)，TVBMV侵染煙草主要發(fā)生在生長旺期，通過蚜蟲以非持久方式進(jìn)行傳播，煙草葉片表現(xiàn)為脈帶花葉，深綠色斑塊。

對于植物病毒病的防治，最有效的方法是抗病品種的篩選與培育，但其存在育種周期長、抗病品種抗性易喪失等不足。另一種方法是弱毒交叉保護(hù)，是利用弱毒突變體侵染，誘導(dǎo)植物自身的免疫系統(tǒng)而防治后期侵染的同樣類型強(qiáng)病毒株系；是一種有效的病毒防治策略。弱毒突變體可以是天然存在的，也可以通過分子生物學(xué)手段進(jìn)行人工制備。

一種弱毒突變體，只能用來防治對應(yīng)的強(qiáng)病毒。如果想同時防治不同的病毒，就需要幾種不同類型的弱毒突變體。但可以通過在一個骨架病毒中插入異源病毒片段，來達(dá)到既防治骨架病毒，又防治插入片段對應(yīng)的病毒的效果，這種突變型病毒就是多價弱毒疫苗。以黃瓜花葉病毒為基礎(chǔ)病毒載體，能夠兼抗黃瓜花葉病毒和煙草脈帶花葉病毒的雙價弱毒疫苗目前還未見有報道。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述研究背景，本發(fā)明的目的是提供一種兼抗CMV和TVBMV的雙價弱毒疫苗，為田間防治CMV和TVBMV引起的植物病毒病提供了疫苗材料和有效防治措施。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：