[發(fā)明專利]一種PD-L1抗體及其提取方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110184612.0
• 申請(qǐng)日: 2021-02-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112940121B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳建明;陳錦霖;趙鐵銘
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳海創(chuàng)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C07K16/00
• 代理公司: 深圳市優(yōu)賽朝聞專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44454
• 代理人: 羅仲輝

一種PD?L1抗體及其提取方法，涉及一種抗體及其提取方法。本發(fā)明PD?L1抗體的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，PD?L1抗體的氨基酸序列SEQ ID NO.2所示；本發(fā)明提取方法為：采用人PD?L1(程序性死亡配體1)全長(zhǎng)蛋白為抗原對(duì)鯊魚(yú)進(jìn)行免疫，然后提取RNA，并采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄為cDNA，PCR法擴(kuò)增獲得vNAR區(qū)編碼基因，再經(jīng)過(guò)篩選、表達(dá)和純化得到PD?L1抗體。本發(fā)明的PD?L1分子量小，只有15KD，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，抗體靈敏度達(dá)到1ng，極大提高了檢測(cè)能力，而線性范圍提高到1到300ng，很好的提高了適應(yīng)檢測(cè)能力范圍，信號(hào)值大幅提高，從500多提高到2000多，本發(fā)明方法所得到的PD?L1抗體(鯊魚(yú)抗體)改進(jìn)了傳統(tǒng)抗體的檢測(cè)能力，增加了檢測(cè)的準(zhǔn)確度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)或生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種抗體及其提取方法。

背景技術(shù)

抗體是結(jié)合抗原的受體，是指機(jī)體在抗原性物質(zhì)的刺激下所產(chǎn)生的一種免疫球蛋白，它能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合。抗體結(jié)構(gòu)由兩條重鏈(H鏈)與兩條輕鏈(L鏈)構(gòu)成(重鏈與輕鏈之間通過(guò)二硫鍵相連接)，每條鏈又可分為可變區(qū)(V區(qū))與恒定區(qū)(C區(qū))，其中可變區(qū)有三個(gè)區(qū)域的氨基酸組成和排列順序高度可變，稱為高變區(qū)(HVR)，由于高變區(qū)在空間結(jié)構(gòu)上可與抗原決定簇形成精密的互補(bǔ)，因而高變區(qū)又稱為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，不同重鏈輕鏈的CDR組合決定了抗體對(duì)抗原的特異性。由于發(fā)現(xiàn)時(shí)間較早，這類抗體被稱為傳統(tǒng)抗體，來(lái)源包括鼠、兔、人以及其他物種。

傳統(tǒng)抗體分子量較大，是150KD左右，它可以與細(xì)菌、病毒或毒素等異源性物質(zhì)結(jié)合而發(fā)揮預(yù)防和治療疾病的作用。作為一種及其重要的原材料，傳統(tǒng)抗體在科研、醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、環(huán)境、食品、民用等諸多領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，具有不可替代的科學(xué)以及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

以傳統(tǒng)抗體在醫(yī)療領(lǐng)域中藥物應(yīng)用為例，近年來(lái)，抗體藥物以其高特異性成為全球藥品市場(chǎng)上炙手可熱的藥品，它是生物制藥產(chǎn)業(yè)中最大類別的產(chǎn)品，如今已被成功用于治療腫瘤、癌癥等多種疾病領(lǐng)域。尤其是PD-L抗體，近年來(lái)在治療腫瘤領(lǐng)域大放異彩。

再以傳統(tǒng)抗體在醫(yī)療領(lǐng)域中體外診斷應(yīng)用為例，體外診斷僅耗費(fèi)了3％的醫(yī)療資源，但是提供了臨床診斷超過(guò)70％的信息，被稱為醫(yī)生的“眼睛”?？贵w是最重要的體外診斷原料之一，廣泛用于酶聯(lián)免疫分析、化學(xué)發(fā)光免疫分析、膠體金側(cè)向?qū)游觥晒饷庖邆?cè)向?qū)游龅葯z測(cè)平臺(tái)。PD-L1抗體在診斷領(lǐng)域也有很好的應(yīng)用。

但是目前傳統(tǒng)抗體為基礎(chǔ)的PD-L1檢測(cè)存在兩個(gè)不足，首先其靈敏度僅為50ng左右，其次其線性范圍比較窄，在50到200ng之間，目前的PD-L1抗體檢測(cè)能力有限。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種PD-L1抗體及其提取方法。

本發(fā)明PD-L1抗體的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，PD-L1抗體的氨基酸序列SEQID NO.2所示。

上述PD-L1抗體的提取方法按照以下步驟進(jìn)行：采用人PD-L1(程序性死亡配體1)全長(zhǎng)蛋白為抗原對(duì)鯊魚(yú)進(jìn)行免疫，然后提取RNA，并采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄為cDNA，PCR法擴(kuò)增獲得vNAR區(qū)編碼基因，再經(jīng)過(guò)篩選、表達(dá)和純化得到PD-L1抗體。

本發(fā)明的PD-L1抗體用人PD-L1(程序性死亡配體1)全長(zhǎng)蛋白作為目的抗原，利用條紋斑竹鯊噬菌體抗體庫(kù)進(jìn)行抗人PD-L1(程序性死亡配體1)蛋白的抗體篩選，成功獲得PD-L1抗體。本發(fā)明的PD-L1分子量小，只有15KD，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，抗體靈敏度達(dá)到1ng,極大提高了檢測(cè)能力，而線性范圍提高到1到300ng，很好的提高了適應(yīng)檢測(cè)能力范圍，信號(hào)值大幅提高，從500多提高到2000多，本發(fā)明的PD-L1抗體(鯊魚(yú)抗體)改進(jìn)了傳統(tǒng)抗體的檢測(cè)能力，增加了檢測(cè)的準(zhǔn)確度。本發(fā)明的PD-L1抗體可以應(yīng)用在抗體的酶聯(lián)免疫(ELISA)的檢測(cè)方法和抗體的免疫印跡(Western blot)的檢測(cè)方法，以及抗體開(kāi)發(fā)的治療性、診斷性、檢測(cè)性的應(yīng)用。

附圖說(shuō)明