[發明專利]一種新型冠狀病毒中和抗體檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202110182291.0
• 申請日: 2021-02-10
• 公開（公告）號: CN112986580A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 李昀地;周洪銳;魏華英;李慧;劉鐘泉;趙娜;張粲;王俊水;肖福磊;李軒;秦月;賈凌云;賀敬文;劉陳針玉;錢龍;李娜;孟佳;李洲
• 申請（專利權）人: 天津中新科炬生物制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 天津企興智財知識產權代理有限公司 12226
• 代理人: 李彥彥

本發明提供了一種新型冠狀病毒中和抗體檢測方法及試劑盒，所述微流控芯片的標記區標記有能與SARS?CoV?2抗原結合的競爭性物質，所述T檢測區包被有能與SARS?CoV?2抗原結合的捕獲性物質，所述C檢測區包被有用于質控作用的抗原或抗體，所述樣本加樣管內預先干燥有納米顆粒標記的SARS?CoV?2抗原。本發明通過體外構建新型冠狀病毒空間模型及細胞表面受體空間模型，創新性的實現中和抗體在模擬間接競爭模式下，中和抗體含量的快速檢測，同時能夠真實有效的評估中和抗體中和新型冠狀病毒的能力。本試劑盒具有準確度高、靈敏度高、特異性好、重復性好等特點，可用于新型冠狀病毒中和抗體的批量、快速檢測。

技術領域

本發明涉及免疫熒光檢測技術領域，尤其是涉及一種新型冠狀病毒中和抗體檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

人體接種疫苗后可通過免疫應答產生保護性抗體，即中和抗體，對中和抗體進行滴度測定，可以判斷疫苗的臨床療效。因此對中和抗體的檢測，可應用于疫苗的研發評價，以及疫苗研發成功后，正式應用于大眾后，對個體自身免疫效果的評價。另外，對于治愈后的新冠患者檢測，可以判斷是否存在再次感染的風險。因此，對于中和抗體的檢測決定了是否可以更安全地重返工作崗位或參加更多的社交活動。

SARS-CoV-2表面棘突S蛋白(spike protein)是冠狀病毒表面重要的受體結合位點，其可與細胞表面病毒特異性受體結合、介導病毒外膜與細胞融合、病毒吸附及穿膜；冠狀病毒S蛋白受體結合域(receptor binding domain，RBD)可使病毒與宿主細胞表面的血管緊張素轉化酶2(angiotensin-converting enzyme2，ACE2)結合，并使病毒進入宿主細胞。當SARS-CoV-2在侵入機體時，會刺激機體產生具有保護作用的中和抗體，專門阻止病原微生物進入細胞，防止感染大部分中和抗體，如2M-10B11和ACE2-fc以S蛋白的RBD為靶點，并阻斷其與ACE2結合，表現出中和活性。

西湖大學研究團隊發現AXL是新冠病毒感染人類呼吸系統的潛在受體，研究團隊發現新冠病毒在人類呼吸系統中可能存在其他重要受體。研究團隊證明肺細胞上的AXL蛋白與新冠病毒刺突蛋白相結合，并在細胞膜上存在強共定位。且與呼吸系統上皮細胞結合強度排名前三的候選受體分別為：AXL蛋白、EGFR蛋白和LDLR蛋白。

目前已經建立的冠狀病毒中和抗體檢測方法有雙抗原夾心法、間接法和競爭法。其中雙抗原夾心法與間接法檢測的是總抗體含量，不能針對性反應樣本中的中和抗體含量。例如，目前已公開專利中，競爭法檢測中和抗體含量多為常規競爭的方式。授權公告號為CN111781354B的已授權專利公開了一種新型冠狀病毒中和性抗體滴度檢測ELISA試劑盒。現有技術多為：標記抗原，包被受體蛋白，樣本中的中和抗體與受體蛋白直接競爭抗原，通過結合的數量反應中和抗體的含量。該方法提供的主要為直接并同時競爭的內環境，存在的問題有：對于低滴度的中和抗體，競爭優勢不顯著，靈敏度較低，對于較高滴度的中和抗體，競爭梯度小，容易造成檢測結果偏差大等問題。同時目前已知的免疫學檢測中，中和抗體檢測均為通過抗體濃度或數量的結合，反應中和抗體的濃度，同時現有技術多用于酶免、膠體金法等試劑盒的檢測，采用微流控免疫熒光法實現快速檢測，目前未見到。

發明內容

有鑒于此，本發明旨在提出一種新型冠狀病毒中和抗體檢測試劑盒及檢測方法，本試劑盒通過體外構建新型冠狀病毒空間模型及細胞表面受體空間模型，創新性的實現中和抗體在模擬間接競爭模式下，中和抗體含量的快速檢測，同時能夠真實有效的評估中和抗體中和新型冠狀病毒的能力。本方法及試劑盒具有靈敏度高、特異性好、準確度高、重復性好等特點，可用于新型冠狀病毒中和抗體的批量、快速檢測。

為達到上述目的，本發明的技術方案是這樣實現的：