[發明專利]一種與子宮內膜容受性輔助診斷相關的miRNA標志物及其應用

有效

• 申請號: 202110181338.1
• 申請日: 2021-02-07
• 公開（公告）號: CN112662758B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發明（設計）人: 沙郁林;賈研;劉敬;葉紅霞;孟祥黔;王靜;曲婷;東亞君;邱竹;黃燕;李鵬昊;閆曉苗;張素娟;李曉開;郭燕華;馮玉婷;姜瑤;鐘影
• 申請（專利權）人: 成都西囡婦科醫院有限公司;沙郁林;賈研
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851
• 代理公司: 成都時譽知識產權代理事務所(普通合伙) 51250
• 代理人: 何悅

本發明公開了一種輔助診斷子宮內膜容受性的miRNA標志物，包括hsa?miR?16?2?3p、hsa?miR?92b?5p、hsa?miR?130a?3p、has?miR?9024?3p的miRNA及其引物；本發明還提供一種輔助診斷子宮內膜容受性的miRNA標志物的應用，其特征在于：包括以下步驟：S1采集母本血液，制備上清液；S2離心柱過濾管中處理并分級過濾，制備miRNA粗品；S3制備miRNA樣品；S4利用試劑盒將得到的miRNA合成cDNA，進行PCR擴增體系和程序，得到miRNA的含量數據；S5構建CT含量曲線，確定不同時期的不同miRNA含量；本發明的有益效果是：通過限定miRNA及其引物，以特異性篩選后的四個引物為檢測基礎，實現快速準確地鑒定子宮內膜容受期。

技術領域

本發明涉及基因工程及生殖醫學領域，具體是一種輔助診斷子宮內膜容受性的miRNA標志物及應用。

背景技術

目前，中國不孕癥的發生率約在15-20％，而且不孕不育患者的數量每年以數十萬的速度遞增。婚育年齡的推遲、工作壓力的堆積以及生活方式的改變等因素直接或間接地減低了人們的生育能力。隨著世界上首例試管嬰兒的降生，體外受精-胚胎移植（IVF-ET）已成為不孕女性盡快獲得妊娠的有效途徑。盡管輔助生殖技術的發展和技術革新，使得大部分不孕癥患者已經能夠通過胚胎體外培養技術獲得優質胚胎進而妊娠，但是仍有一部分優質胚胎在妊娠早期甚至極早期發生丟失。研究表明，胚胎因素和子宮內膜容受性因素與胚胎成功種植存在著一定的相關性。

子宮內膜容受性是指子宮內膜接受胚胎的能力，即允許受精卵定位、黏附、侵入并使內膜間質發生改變從而植入子宮內膜的一種能力。子宮內膜容受性有一定的時間限制，這段時間被稱為“種植窗”期（Windows of Implantation，WOI）。“種植窗”期也稱為容受期，一般出現在排卵后的6~8 d 或受精后的5~7 d，需要由黃體分泌的雌、孕激素的支持，同時也受多種基因、蛋白質、細胞因子和粘附分子的影響，而在輔助生殖中的體外受精-胚胎移植（in-vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）中，通常會建立人工模擬月經周期，在子宮內膜達到7毫米時，通過給與不同劑型的黃體酮，使子宮內膜從增殖狀態轉化分化狀態，這個給黃體酮的時機被稱為黃體轉化期，黃體轉化期后的第3-5天可以把胚胎放入子宮內。正常情況下，只有黃體轉化期后第5天左右，子宮內膜能容受胚胎，其他時候胚胎不被容受也就不會著床。

胚胎植入與種植窗口開放的同步化，是著床成功的必要條件，2/3 的反復種植失敗的是由于子宮內膜容受性不足引起，因此良好的子宮內膜容受性是成功的胚胎植入必備條件。而目前的常規檢測手段是先對子宮內膜進行活檢，因活檢為有創手術，因此需要在下一個IVF-ET周期進行胚胎移植，而兩個周期之間存在不同的周期其容受性的誤差，消耗大量時間的同時對母體的損害也不可逆。

而大量研究表明，子宮內膜容受性和多個基因（如同源框基因A10、同源框基因C8、半乳糖凝集素-3、單外顯子基因叉頭框L2、人類與果蠅ems 的同源結構域基因Emx2 等）、蛋白（如IV 型膠原蛋白、妊娠相關蛋白、雌激素受體、孕激素受體、骨橋蛋白、整合素等）、細胞因子（如LIF 、IGF1、白細胞介素Ⅰ、集落刺激因子Ⅰ、血管內皮生長因子等）、卵巢甾體激素等有關。

miRNA 是一種非編碼RNA，高度保守，長度約18~22 核苷酸，通過靶向mRNA 進行切割或轉錄抑制來調節轉錄后水平的基因表達。miRNA 廣泛存在于細胞和組織中，參與多種生物過程。研究已經證實血清/血漿中存在幾百種的miRNAs，這些小分子RNAs性質穩定、含量豐富、易于定量檢測，且存在顯著的疾病特異性。現有的成熟的技術，包括定性和定量miRNA分子的技術，表明利用血清miRNAs作為分子生物標志物的方法比傳統的特異蛋白分子標記方法將更加有效，為生物標志物開拓了新境界。并且已有研究表明miRNA 的調節與生殖障礙有關，如多囊卵巢綜合征、子宮內膜異位癥、子宮內膜息肉、輸卵管積水等。