[發明專利]一種m6A“閱讀器”YTHDF2基因改造方法及其應用

在審

• 申請號: 202110180255.0
• 申請日: 2021-02-08
• 公開（公告）號: CN112941105A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 唐玉新;宋德平;張帆帆;葉昱;黃冬艷
• 申請（專利權）人: 江西農業大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/55;C12N15/12;C12N5/10;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 南昌金軒知識產權代理有限公司 36129
• 代理人: 文珊

1.一種m6A“閱讀器”YTHDF2基因改造方法，其特征在于，所述改造方法利用基因編輯技術對YTHDF2基因進行改造，獲得敲除YTHDF2基因的細胞系，包括：sgRNA序列的設計，YTHDF2基因敲除，質粒構建和改造基因重組細胞系篩選。

2.根據權利要求1所述的m6A“閱讀器”YTHDF2基因改造方法，其特征在于，所述基因編輯技術為CRISPR/Cas9技術。

3.根據權利要求1所述的m6A“閱讀器”YTHDF2基因改造方法，其特征在于，所述sgRNA序列選擇所述m6A“閱讀器”YTHDF2基因第三編碼區和第四編碼區前端1/3區域進行設計；

所述序列如SEQ ID NO.3與SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5與SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7與SEQ ID NO.8所示。

4.根據權利要求1所述的m6A“閱讀器”YTHDF2基因改造方法，其特征在于，所述YTHDF2基因敲除技術還包括退火體系：sgRNA-F(100μM)1μL、sgRNA-R(100μM)1μL、10×T4Ligation Buffer 1μL、ddH₂O 6.5μL、T4 PNK 0.5μL。

5.根據權利要求1所述的m6A“閱讀器”YTHDF2基因改造方法，其特征在于，所述質粒構建包括重組質粒構建和驗證質粒構建，所述重組質粒為pCas9-YTHDF2-1、pCas9-YTHDF2-2、pCas9-YTHDF2-3，所述驗證質粒為pCDNA3.1-mcherry-YTHDF2。

6.根據權利要求1所述的m6A“閱讀器”YTHDF2基因改造方法，其特征在于，所述重組細胞系為真核細胞。

7.根據權利要求6所述的m6A“閱讀器”YTHDF2基因改造方法，其特征在于，所述真核細胞為哺乳動物細胞、酵母細胞、昆蟲細胞中的任一種。

8.根據權利要求7所述的m6A“閱讀器”YTHDF2基因改造方法，其特征在于，所述哺乳動物細胞選自非洲綠猴腎細胞Vero 81。

9.根據權利要求8所述的m6A“閱讀器”YTHDF2基因改造方法，其特征在于，所述篩選出的重組細胞系為Vero 81-YTHDF2-KD。

10.根據權利要求1-9任一項所述的m6A“閱讀器”YTHDF2基因改造方法的應用，其特征在于，所述基因改造方法在改變豬流行性腹瀉病毒增殖中的應用。