[發明專利]水工混凝土用芽孢桿菌制劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110176259.1
• 申請日: 2021-02-09
• 公開（公告）號: CN112760266B
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發明（設計）人: 劉洪波;張多英;孟昭輝;張晶;鄭國臣
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C04B41/62;C12R1/07;C12R1/38
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 岳泉清

1.水工混凝土用芽孢桿菌制劑，其特征在于該制劑包括強光催化芽孢桿菌(Bacillus enhanphotocatalysis)T4、適冷假單胞菌(Pseudomonas extremaustralis)Y39-6的胞外聚合物和保護劑；

所述強光催化芽孢桿菌(Bacillus enhanphotocatalysis)T4保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2019年11月20日，保藏編號為CGMCC No.18986；

所述適冷假單胞菌(Pseudomonas extremaustralis)Y39-6保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2018年10月29日，保藏編號為CGMCC No.16652。

2.根據權利要求1所述的水工混凝土用芽孢桿菌制劑，其特征在于所述保護劑由腐殖酸、TiO₂和水組成；其中腐殖酸的質量濃度為0.5％～2％，TiO₂的質量濃度為0.05％～0.1％。

3.如權利要求1所述的水工混凝土用芽孢桿菌制劑的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

一、在UV₂₅₄條件下，對強光催化芽孢桿菌T4在固體活化培養基上進行活化；挑取活化好的單菌落接種于液體培養基上進行富集培養10-24h，得到富集培養液；然后將富集培養液接種于液體培養基中培養至菌液中細菌數均為10⁹個/mL；通過離心棄去上清液，保留菌體沉淀；

二、將適冷假單胞菌(Pseudomonas extremaustralis)Y39-6接種到胞外聚合物培養液中，培養條件為30℃，pH值為7.2～7.6，培養過程中保持培養液中溶解氧為3～5mg/L，培養時間為24h；培養完成后對菌液進行離心，保留上清，即為含胞外聚合物上清液；

三、將步驟一中制備好的菌體沉淀與步驟二中得到的含胞外聚合物上清液混合，均質，加入保護劑，制備成芽孢桿菌制劑。

4.根據權利要求3所述的水工混凝土用芽孢桿菌制劑的制備方法，其特征在于步驟一中固體活化培養基配方為：碳源1g/L，NH₄Cl 0.1～0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.01～0.05g/L，K₂HPO₄ 0.05～0.2g/L，NaCl 0.05～0.12g/L，MnSO₄·4H₂O 0.01g/L，FeSO₄ 0.01g/L，篩選用催化劑0.5～1g/L，瓊脂18g/L，其中碳源為腐殖酸、葡萄糖或淀粉，篩選用催化劑為TiO₂、鐵粉或硫酸亞鐵。

5.根據權利要求3所述的水工混凝土用芽孢桿菌制劑的制備方法，其特征在于步驟一中富集培養的條件為溫度35℃，振蕩速度180r/min，好氧，UV₂₅₄紫外光照射。

6.根據權利要求3所述的水工混凝土用芽孢桿菌制劑的制備方法，其特征在于步驟一中液體培養基配方為：碳源1g/L，NH₄Cl 0.1～0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.01～0.05g/L，K₂HPO₄0.05～0.2g/L，NaCl 0.05～0.12g/L，MnSO₄·4H₂O 0.01g/L，FeSO₄ 0.01g/L，篩選用催化劑0.5～1g/L，其中碳源為腐殖酸、葡萄糖或淀粉，篩選用催化劑為TiO₂、鐵粉或硫酸亞鐵。