[發明專利]多孔Co3

在審

• 申請號: 202110173590.8
• 申請日: 2021-02-09
• 公開（公告）號: CN112964706A
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發明（設計）人: 黃小煥;周程寅;劉松;徐佳;吳遠根
• 申請（專利權）人: 貴陽海關綜合技術中心（貴州國際旅行衛生保健中心;貴陽海關口岸門診部）
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司 52002
• 代理人: 蘭艷文

本發明公開了一種多孔Co3O4過氧化物酶應用于草甘膦快速比色檢測方法，包括以下步驟：(1)將含有草甘膦的樣品與1ug/mL濃度的多孔Co₃O₄溶液混勻，在30℃下孵育10min；(2)隨后向混合溶液中加入pH為6.0、濃度為5mM的NaAc緩沖溶液和濃度為8 mM的H₂O₂和濃度為1.5 mM的TMB底物溶液進行顯色反應，反應10min，通過測定混合溶液在650 nm處的吸光值變化來判定草甘膦的含量。本發明對草甘膦最低檢測限為2.37 ug/L，具有檢測特異性好、肉眼可辨、操作簡便等優點，不需要依賴大型儀器就可以實現草甘膦農藥殘留的快速檢測，可以廣泛應用于農產品中有機磷農藥檢測。

技術領域

本發明屬于農產品中有機磷農藥殘留檢測領域，尤其涉及在水相緩沖液體系中，運用比色法測定檢測體系在650nm處的特征吸收峰變化，并通過肉眼判定草甘膦農藥的檢測方法。

背景技術

草甘膦是一種廣譜性的有機磷除草劑，它通過抑制植物重要代謝途徑中5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸酶的活性，導致植物死亡，在過去幾十年間，由于其較高的除草活性，被廣泛應用于農業的植被控制當中。雖然評估機構將其列為一種低危害的化合物，但是已有研究表明，草甘膦能夠影響細胞調節、導致慢性腎病，甚至引起癌癥。目前，草甘膦的濫用，已經導致了土壤、水、農產品的污染。這種有害的微量殘留物很容易通過農產品進入人體內，對人類建康造成潛在威脅。因此，中國農業部和美國環境保護署(EPA)發布相關的標準，規定農產品中草甘膦殘留最大限量標準為500μg/L。

傳統的農藥檢測方法有氣相色譜法、液相色譜法、色譜-質譜聯用法，這些方法雖然具有靈敏度高、可靠性強的優勢，但檢測儀器價格昂貴、檢測時間長、需專業人士操作等缺點，所以不能滿足現場檢測的需求。現場快速檢測方法有免疫分析法和酶抑制法,免疫分析法包括酶免疫法、熒光免疫法、放射免疫法和流動注射免疫法，但由于抗原抗體的開發過程需要投入較多資金和較長時間，所以免疫分析方法的應用也有一定的局限性。酶抑制法是基于農藥靶向酶，乙酰膽堿脂酶的抑制反應和水解反應所發展起來的農藥快速檢測方法，但這些方法利用乙酰膽堿酶、植物脂酶等，這些生物蛋白具有制備成本高、受天然蛋白工作條件限制等缺點，無法實現長遠的應用。

多孔Co₃O₄(四氧化三鈷)是一種新出現的人工酶，具有模擬過氧化物酶的活性，能夠催化底物產生顏色變化。近年，基于多孔Co₃O₄過氧化物酶催化活性所建立的分析方法已被成功應用于環境和食品檢測等領。然而，迄今為止，多孔Co₃O₄過氧化物酶(多孔Co₃O₄納米酶)的活性還未被應用于草甘膦檢測當中。我們發現草甘膦能夠抑制多孔Co₃O₄過氧化物酶的催化活性，導致傳感溶液的顏色發生顯著改變。據此，建立了一種基于多孔Co₃O₄過氧化物酶活性的草甘膦檢測方法。

發明內容

本發明目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種肉眼可辨的草甘膦比色檢測方法，具有肉眼可辨、靈敏度高、特異性強、操作便捷，檢測快速等優勢，可廣泛應用于農產品中草甘膦殘留的快速檢測。

本發明的目的是通過以下技術方案得以實現的：

一種多孔Co₃O₄過氧化物酶應用于草甘膦快速比色檢測方法，包括以下步驟：

(1)將含有草甘膦的樣品與1ug/mL濃度的多孔Co₃O₄溶液混勻，在30℃下孵育10min；