[發明專利]配方羊奶粉中牛乳清成分含量的ELISA檢測試劑盒制備方法

在審

• 申請號: 202110172324.3
• 申請日: 2021-02-08
• 公開（公告）號: CN112858695A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 陳德坤;楊睿;馬文濤;王云鵬
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/535;C07K16/18;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司 61114
• 代理人: 韓翎

本發明公開了一種配方羊奶粉中牛乳清成分含量的ELISA檢測試劑盒制備方法。本發明采用常規傳統方法制備并純化的牛乳球蛋白多克隆抗體作為包被抗體，采用本發明研制的能分泌特異性識別β?乳球蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞1?β，制備單克隆抗體（作為檢測抗體），建立夾心ELISA檢測方法，并組裝成試劑盒，該試劑盒最低檢測限度為0.25ng/ml。

一、技術領域：

本發明涉及雜交瘤細胞株以及單克隆抗體的純化及鑒定技術領域，具體涉及一種配方羊奶粉中牛乳清成分含量的ELISA檢測試劑盒制備方法。

二、背景技術：

羊奶具有優越的營養價值、易于消化吸收，被稱為“奶中之王”。在部分歐洲國家也被視為營養佳品。羊奶粉是我國羊奶市場上所占份額最多的產品，生產羊奶粉的乳品廠主要集中在陜西、山東、遼寧等地。

目前羊奶粉產品主要包括全脂奶粉、脫脂奶粉、嬰幼兒配方奶粉及乳清蛋白粉等。其中，嬰幼兒配方羊奶粉售價遠遠高于羊奶粉及羊奶制品，其成分也更為復雜。嬰幼兒配方羊奶粉又稱作母乳化羊奶粉，它為了滿足嬰兒的營養需要，以新鮮羊奶為主要原料，在普通奶粉的基礎上去除了部分酪蛋白，增加了乳清粉制成奶粉產品。

我國嬰幼兒配方乳粉市場需求大、行業發展迅速，但發展時間短。目前，我國103家嬰幼兒配方乳粉生產企業共有近2000個配方，個別企業甚至有180余個配方。嬰幼兒配方乳粉配方過多、過濫，配方制定隨意、更換頻繁等問題突出，存在一定的質量安全風險隱患。

按照新修訂食品安全法要求，在廣泛征求意見基礎上，2016年6月6日，國家食品藥品監督管理總局頒布了《嬰幼兒配方乳粉產品配方注冊管理辦法》。在《嬰幼兒配方乳粉產品配方注冊管理辦法》在其第三章第三十一條中，明確規定了“產品名稱中有動物性來源的，應當根據產品配在配料表中如實表明使用的生乳、乳粉、乳清(蛋白)粉等乳制品原料的動物性來源。”從保障我國消費者權益與食品安全，以及加強我國食品安全監管部門的監督能力的角度出發，嬰幼兒配方羊奶粉中牛源性成分的快速檢測方法的建立具有重大意義。

牛奶及牛奶粉中也含有β-乳球蛋白，因此還可以通過檢測牛β-乳球蛋白的成分從而達到檢測羊奶粉中牛源性成分的目的。

現有的檢測方法多是基于羊乳和牛乳的蛋白質差異，比如等電點聚焦電泳、高效液相色譜等。由于乳粉生產工藝復雜，要經過高溫過程，蛋白質性質會發生改變，在加上方法操作復雜，對人員技術要求較高，使得這些方法在日常監測中的應用受到限制。

現有的牛β-酪蛋白檢測試劑盒只能檢測配方奶粉中的牛源性成分即牛β-酪蛋白，無法檢測配方羊奶粉、嬰幼兒配方羊奶粉中的添加的牛乳清粉、乳清蛋白等成分。而牛乳清粉是配方羊奶粉、以及嬰幼兒配方羊奶粉中很重要的配方成分，因此急需一種檢測試劑盒。

三、發明內容

本發明的提供一種配方羊奶粉中牛乳清成分含量的ELISA檢測試劑盒制備方法，該檢測方法操作簡單，檢測結果靈敏穩定，適用于大批量樣本檢測。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：一種配方羊奶粉中牛乳清成分含量的ELISA檢測試劑盒制備方法，其特征在于：所述制備方法為：

采用特異性識別牛β-乳球蛋白的單克隆抗體的雜交瘤細胞株1-β作為檢測抗體，建立并組裝牛β-乳球蛋白ELISA檢測試劑盒；

雜交瘤細胞株1-β于2020年10月22日于保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO.C2020210。

所述的檢測抗體的濃度為0.1μg/孔-24μg/孔，加入檢測抗體后的孵育溫度為37℃，時間為30min-120min。

將檢測樣品加入酶標板孔中的孵育時間為40min-120min。

所述試劑盒的最低檢測限度為0.25ng/ml。

與現有技術相比，本發明具有如下優點和效果：