[發(fā)明專利]基于光學(xué)三原色的多色測(cè)流免疫層析試紙條及其制備和檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110170874.1
• 申請(qǐng)日: 2021-02-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112924669B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 華修德;王鳴華;陳賀;丁園
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N21/78
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務(wù)所 32237
• 代理人: 肖明芳

本發(fā)明公開(kāi)一種基于光學(xué)三原色的多色測(cè)流免疫層析試紙條及制備方法，通過(guò)將競(jìng)爭(zhēng)免疫分析和非競(jìng)爭(zhēng)免疫分析分別標(biāo)記不同示蹤物，并集成在一張?jiān)嚰垪l上，基于相加和相減三原色的原理實(shí)現(xiàn)隨著分析物濃度的變化，在檢測(cè)線（T線）上呈現(xiàn)出不同顏色，提高半定量分析的準(zhǔn)確性和直觀性，試紙條的控制線（C線）會(huì)隨著T線結(jié)合標(biāo)記物量的不同也呈現(xiàn)出不同顏色，可用于校正檢測(cè)結(jié)果，在定量分析中，多色信號(hào)可互為內(nèi)在參比，提高了多色試紙條定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種基于光學(xué)三原色的多色測(cè)流免疫層析試紙條及其制備和檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

免疫快速檢測(cè)具有快速、簡(jiǎn)便、低成本及可實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等特點(diǎn)。在免疫分析方法中，免疫層析分析(試紙條)可以在短時(shí)間內(nèi)完成對(duì)目標(biāo)物的篩查，是最實(shí)用的免疫快速檢測(cè)方法。目前，試紙條已在廣泛應(yīng)用在食品安全和環(huán)境安全的監(jiān)測(cè)、動(dòng)植物病原物的鑒定和檢疫，以及醫(yī)學(xué)診斷等。然而，試紙條在檢測(cè)時(shí)，通常根據(jù)其檢測(cè)線(T線)的顏色深淺或有無(wú)進(jìn)行判定，使檢測(cè)結(jié)果的呈現(xiàn)不夠直觀、易產(chǎn)生誤判，同時(shí)降低了檢測(cè)的敏感性。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明的目的在于提供一種新穎、快速、靈敏、準(zhǔn)確的基于光學(xué)三原色的多色測(cè)流免疫層析試紙條、其制備方法和檢測(cè)方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出了一種基于光學(xué)三原色的多色測(cè)流免疫層析試紙條，包括樣品墊、結(jié)合墊、層析膜和吸水墊，樣品墊的右端搭設(shè)在結(jié)合墊的左端，所述結(jié)合墊的右端搭設(shè)在層析膜的左端，所述層析膜上從左至右依次設(shè)置有檢測(cè)線和控制線，所述吸水墊的左端搭設(shè)在層析膜的右端，

所述結(jié)合墊上涂覆有標(biāo)記的示蹤物，其中，所述示蹤物包括第一示蹤物和第二示蹤物，第一示蹤物和第二示蹤物分別與待檢測(cè)物的競(jìng)爭(zhēng)免疫分析試劑和非競(jìng)爭(zhēng)免疫分析試劑進(jìn)行標(biāo)記，所述第一示蹤物和第二示蹤物為具有不同發(fā)光顏色的發(fā)光材料，且兩種顏色混合后能形成第三種顏色；或所述第一示蹤物和第二示蹤物分別為具有不同顏色的顏色材料，且兩種顏色混合后能形成第三種顏色；所述檢測(cè)線包被捕獲待檢測(cè)物的抗體，所述控制線包被捕獲標(biāo)記示蹤物的試劑。例如，使用鏈霉親和素-生物素系統(tǒng)完成示蹤物標(biāo)記時(shí)為，所述檢測(cè)線為羊抗鼠抗體，控制線為兔抗鏈霉素親和素抗體，而當(dāng)示蹤物直接標(biāo)記于競(jìng)爭(zhēng)免疫分析試劑或非競(jìng)爭(zhēng)免疫分析試劑時(shí)，所述控制線包被二抗、protein G等。

本發(fā)明所述的發(fā)光材料是指能夠以某種方式吸收能量，將其轉(zhuǎn)化成光輻射(非平衡輻射)的物質(zhì)材料；本發(fā)明所述的顏色材料為具有特定的分光反射率分布，能給出特定固有色色感的物質(zhì)。

對(duì)于發(fā)光材料和顏色材料的類型不做限制，如發(fā)光材料可以選用發(fā)光量子點(diǎn)，熒光材料等，顏色材料為具有一些顏色的材料，如納米金材料，藍(lán)色的普魯士藍(lán)，具有顏色的乳膠微球等。

本發(fā)明利用的是光學(xué)的三原色原理，具體地，加法混合是指色光的混合，兩種以上的光混合在一起，光亮度會(huì)提高，混合色的光的總亮度等于相混各色光亮度之和。色光混合中，三原色是紅、綠、藍(lán)。這三色光是不能用其它別的色光相混而產(chǎn)生的，而紅光+綠光＝黃光，綠光+藍(lán)光＝青光，藍(lán)光+紅光＝紫光，即產(chǎn)生了第三種顏色。減法混合主要是指的色料的混合。減法混合的三原色是加法混合的三原色的補(bǔ)色，例如，紅色+藍(lán)色＝紫色，黃色+紅色＝橙色，黃色+藍(lán)色＝綠色。具體地，當(dāng)待分析為小分子時(shí)，所述競(jìng)爭(zhēng)免疫分析試劑為待分析物的模擬表位多肽或競(jìng)爭(zhēng)抗原，所述非競(jìng)爭(zhēng)試劑為待分析物的抗免疫復(fù)合體多肽或抗體。

當(dāng)待分析物為大分子時(shí)，所述競(jìng)爭(zhēng)免疫分析試劑為待分析物的模擬表位，所述非競(jìng)爭(zhēng)免疫分析試劑為待分析物的檢測(cè)抗體。

示蹤物可以用現(xiàn)有技術(shù)中常見(jiàn)的標(biāo)記方法進(jìn)行標(biāo)記，如利用鏈霉親和素-生物素系統(tǒng)，或者使用共價(jià)鍵、弱作用力直接標(biāo)記。具體地，可以通過(guò)活潑酯法將普魯士藍(lán)或者藍(lán)色乳膠微球直接標(biāo)記在模擬表位上，靜電作用的方法將納米金或活潑酯法將紅色乳膠微球直接標(biāo)記在檢測(cè)抗體上。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述示蹤物首先標(biāo)記在鏈霉親和素上，然后通過(guò)鏈霉親和素-生物素系統(tǒng)完成示蹤物對(duì)生物素化的競(jìng)爭(zhēng)免疫分析試劑和非競(jìng)爭(zhēng)免疫分析試劑的標(biāo)記。