[發明專利]一種真姬菇HM21菌種的SSR標記指紋圖譜及其構建方法與應用

有效

• 申請號: 202110166710.1
• 申請日: 2021-02-04
• 公開（公告）號: CN112795687B
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發明（設計）人: 龔明;李燕;吳瑩瑩;陳洪雨;汪瀅;唐利華
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 南京燦爛知識產權代理有限公司 32356
• 代理人: 王江南

本發明公開了一種真姬菇HM21菌種的SSR標記指紋圖譜及其構建方法與應用，包括該指紋圖譜由6對SSR標記組成。構建方法包括：(1)菌絲培養；(2)基因組DNA的提取；(3)SSR分子標記的檢測；(4)毛細管電泳檢測。應用包括：對真姬菇菌種進行SSR標記擴增，將得到的帶型與指紋圖譜對照，與該組指紋圖譜一致即為真姬菇HM21菌種。本發明與常規形態學檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短、準確性高、可重復性好的優點，在收集的國內外56個真姬菇栽培主栽菌種中具有真姬菇HM21菌種的專一性。

技術領域

本發明屬于真姬菇菌種的檢測技術領域，具體涉及一種真姬菇HM21菌種的SSR標記指紋圖譜及其構建方法與應用。

背景技術

真姬菇(拉丁文名Hypsizygus marmoreus(Peck)H.E.Bigelow)屬擔子菌門、傘菌綱、傘菌目、離褶傘科，因其菌蓋表面的大理石斑紋而得名。其外形美觀、質地脆嫩、具有獨特的海鮮味且價格經濟，受到廣大消費者喜愛。真姬菇不僅含有豐富維生素和18種氨基酸，近年研究還發現真姬菇中所含的小分子化合物、多糖和多肽等成分具有溶血、抗氧化、抑制白血病和淋巴瘤細胞、降血脂、抗炎和抗氧化等功能，是一種經濟價值很高的食藥兼用菌。自從2001年我國第一家真姬菇工廠化栽培企業成立以來，真姬菇成為了我國市場發展較快的新型食用真菌之一。2019年中國真姬菇工廠化總產量為32.8萬噸，較2018年同比增長58.63％，占食用菌工廠化總產量的9.6％，在我國工廠化栽培食用真菌生產總量中排名第三。

優質菌種在真姬菇的工廠化栽培中起著舉足輕重的作用。目前，我國工廠化生產企業使用的真姬菇菌種主要為日本引入菌種或在其基礎上進一步雜交選育而成，栽培后子實體為棕色的稱為蟹味菇，子實體為白色的又稱白玉菇或玉龍菇。盡管工廠化生產的產量逐年提升，但部分菌種仍存在栽培周期長、單產低、單根子實體外觀整齊度差和易出現瘤蓋等問題，這些缺陷都可能導致生產成本的增加，降低產品的市場競爭力。另一方面，由于真姬菇工廠化生產菌株的多樣性不高，產品外觀近似，無法滿足市場消費者多樣化的需求。我國有著豐富的真姬菇野生和自然栽培資源，高效利用這些優質的資源，拓展菌株的遺傳基礎，有利于國內高產、優質、特色真姬菇菌株的選育。

隨著《國際植物新品種保護法》的頒布實施，建立成熟、快速、精準的分子生物學鑒定技術體系成為保護食用菌品種知識產權的有力手段。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種真姬菇“HM21”菌種的SSR標記指紋圖譜及其構建方法與應用，該指紋圖譜與常規形態學檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短，準確性高，重復性好的優點。

真姬菇(Hypsizygusmarmoreus)HM21，于2020年12月2日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，地址為廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓，廣東省微生物研究所，保藏編號為GDMCC No:61414。

本發明的一種真姬菇“HM21”菌種的SSR標記指紋圖譜，該指紋圖譜由6對SSR標記組成，是基于真姬菇基因組簡單重復序列片段開發SSR引物，擴增帶型好，重復性高的SSR引物，標記詳細信息如表1：

表1 SSR標記詳細信息列表

本發明的一種真姬菇“HM21”菌種的SSR標記指紋圖譜的構建方法，包括：

(1)菌絲培養：將真姬菇菌種轉接到馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養基上，22℃培養10-14d后收集菌絲；

(2)基因組DNA的提取：利用真菌DNA提取試劑盒，按照試劑盒實驗步驟提取基因組DNA，并取2μL DNA進行1.2％瓊脂糖凝膠電泳檢測。紫外分光光度法檢測總基因組DNA濃度和純度，調整樣品DNA的濃度一致；

(3)SSR分子標記引物開發：根據真姬菇菌株的基因組重測序結果，選取多態性序列設計SSR引物并合成；