[發(fā)明專利]流動供給緩沖液的蛋白轉(zhuǎn)印方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110166703.1
• 申請日: 2021-02-07
• 公開（公告）號: CN112816710A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方利;張碩;曹飛婷
• 申請（專利權(quán)）人: 常州天地人和生物科技有限公司;江蘇江南烯元石墨烯科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 常州市夏成專利事務(wù)所(普通合伙) 32233
• 代理人: 王敏

本發(fā)明涉及蛋白轉(zhuǎn)印方法領(lǐng)域，尤其是流動供給緩沖液的蛋白轉(zhuǎn)印方法。該方法的步驟為：A、凝膠上設(shè)有穿孔，穿孔內(nèi)設(shè)有蛋白，將陽極板、聚合物膜、海綿塊一、電泳后的凝膠、海綿塊二、陰極板依次堆疊固定在一起；B、然后將陽極液從海綿塊一頂部灌入，從海綿塊一底部流出，將陰極液從海綿塊二頂部灌入，從海綿塊二底部流出；陽極液與陰極液的體積比為1:1；陽極液與陰極液通過泵體持續(xù)供液。本發(fā)明的有益效果是，該發(fā)明通過連續(xù)供液的方式使得陽極液和陰極液進(jìn)行持續(xù)流動，從而獲得散熱的效果。并且通過將陽極液與陰極液分離可帶來高電流效果，通過陰極液與陽極液分開的方式進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白轉(zhuǎn)印方法領(lǐng)域，尤其是流動供給緩沖液的蛋白轉(zhuǎn)印方法。

背景技術(shù)

Western Bolt技術(shù)被稱為蛋白免疫印跡技術(shù)，其全部過程包括，首先進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，電泳后的凝膠進(jìn)行蛋白轉(zhuǎn)印（轉(zhuǎn)膜），蛋白條帶會轉(zhuǎn)移到一張聚合物膜上，再由膜進(jìn)行抗體孵育，孵育完畢進(jìn)行顯影。其中蛋白轉(zhuǎn)印（轉(zhuǎn)膜）技術(shù)為其中重要的一步。

現(xiàn)有的轉(zhuǎn)印技術(shù)分為濕式，半干式，干式。

半干式轉(zhuǎn)印及是將海綿-濾紙-膜-丙烯酰胺凝膠-濾紙-海綿的復(fù)合物，夾入板式電極之間，在沒有緩沖液補充的情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。

相對于普通的半干轉(zhuǎn)系統(tǒng)而言，緩沖液是在一個封閉的體系中完成轉(zhuǎn)膜的，

它通過將凝膠和膜的夾層放置在浸泡過轉(zhuǎn)移緩沖液的吸水介質(zhì)之間進(jìn)行轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)膜液的體系采用陰極液與陽極液分開的方式進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，以此帶來在低電壓下的高電流效果。

但隨之產(chǎn)生的問題是，在高電流下系統(tǒng)的發(fā)熱十分嚴(yán)重，而且沒有有效的降溫手段。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有的系統(tǒng)發(fā)熱嚴(yán)重的不足，本發(fā)明提供了流動供給緩沖液的蛋白轉(zhuǎn)印方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種流動供給緩沖液的蛋白轉(zhuǎn)印方法，該方法的步驟為：

A、凝膠上設(shè)有穿孔，穿孔內(nèi)設(shè)有蛋白，將陽極板、聚合物膜、海綿塊一、電泳后的凝膠、海綿塊二、陰極板依次堆疊固定在一起；

B、然后將陽極液從海綿塊一頂部灌入，從海綿塊一底部流出，將陰極液從海綿塊二頂部灌入，從海綿塊二底部流出；陽極液與陰極液的體積比為1:1；陽極液與陰極液通過泵體持續(xù)供液；

C、陽極板與陰極板通電之后，使得陽極板與陰極板之間實現(xiàn)均勻電場，在凝膠和聚合物膜橫截面上通過電流，讓帶負(fù)電荷的蛋白由陰極板方向向陽極板轉(zhuǎn)移，受到聚合物膜的有效截留而由凝膠轉(zhuǎn)印到聚合物膜上。

根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，進(jìn)一步包括所述陽極液的各組分重量配比為：三羥基甲氨基甲烷1-2.5%、甲醇10-20%、水79-87.5%。

根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，進(jìn)一步包括所述陰極液的各組分重量配比為：0-1%甘氨酸、0.01%-0.5%三羥甲基氨基甲烷、0.01%-0.1% 乙二胺四乙酸二鈉、0.01%-0.1%十二烷基硫酸鈉、10-20%甲醇、水79.97-88.3%。

根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，進(jìn)一步包括步驟C中，陽極板與陰極板通電電源的電壓為20-300v，電流為200-2000mA。

根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，進(jìn)一步包括海綿塊一上方設(shè)有陽極液流道，海綿塊二上方設(shè)有陰極液流道，陽極液流道和陰極液流道均由數(shù)個直線流道組成。

本發(fā)明的有益效果是，該發(fā)明通過連續(xù)供液的方式使得陽極液和陰極液進(jìn)行持續(xù)流動，從而獲得散熱的效果。并且通過將陽極液與陰極液分離可帶來高電流效果，通過陰極液與陽極液分開的方式進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。

具體實施方式

一種復(fù)合填料改性尼龍的制備方法，該制備方法的步驟為：

一種流動供給緩沖液的蛋白轉(zhuǎn)印方法，該方法的步驟為：