[發明專利]抗IMP型碳青霉烯酶雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用

有效

• 申請號: 202110166074.2
• 申請日: 2021-02-07
• 公開（公告）號: CN112501131B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 苑慶華;何永勝;李可可;陳曉玲;周躍輝;樊琳琳;王玉芳;臧丹戎
• 申請（專利權）人: 天津一瑞生物科技股份有限公司;北京金山川科技發展有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/40;C12N15/13;G01N33/573;G01N33/577
• 代理公司: 天津諾德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 12213
• 代理人: 欒志超;王旭

本發明提供一種抗IMP型碳青霉烯酶雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用，通過小鼠雜交瘤單克隆抗體篩選及RT?PCR法克隆Ig可變區基因，獲得穩定分泌抗IMP型碳青霉烯酶抗體的雜交瘤細胞株及其可變區序列，并用ELISA方式對抗體結合特異性進行了鑒定；獲得的抗IMP型碳青霉烯酶抗體能夠用于檢測IMP型碳青霉烯酶，效價達到了1:640000以上，將其制備成體外診斷試劑盒或微流體芯片，能夠用于耐藥菌株的早期分型，指導用藥，輔助臨床感染控制和治療，對提高我國的醫療衛生水平具有重要意義。

技術領域

本發明屬于抗體制備技術領域，尤其是涉及一種抗IMP型碳青霉烯酶雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用。

背景技術

碳青霉烯類抗生素是控制臨床致病菌感染最有效的藥物之一，產碳青霉烯酶生物（CPO）和耐碳青霉烯腸桿菌因其廣譜耐藥性成為了一個全球公共衛生問題，患者的治療方法非常有限。腸桿菌科細菌是院內感染和社區獲得性感染的重要病原菌。近年來由于頭孢菌素的廣泛應用，腸桿菌科中產超廣譜β－內酰胺酶（extended spectmbeta-lactamases,ESBLs）及Amp C酶的菌株比例呈明顯上升趨勢，治療此類菌株感染的首選藥物是碳青霉稀類抗菌藥物。但是，伴隨著亞胺培南和美羅培南在臨床上的大量使用，耐碳青霉煉類腸桿菌科細菌（Carbapenem-resistanctenterobacteriaceae，CRE）數量也呈逐年上升趨勢。臨床研究表明CRE菌株對多種抗菌藥物耐藥，因此臨床治療藥物的可選擇范圍明顯受到限制。此外，感染患者往往伴有并發疾病，給臨床感染控制和治療帶來極大困難。

IMP型酶是獲得性MBLs中非常常見的一種，屬Bush分類3a亞群，能水解幾乎所有β-內酰胺類抗菌藥物，其水解活性不被β-內酰胺酶抑制劑克拉維酸、舒巴坦和三唑巴坦等抑制，但碳青霉烯可被金屬螯合物如EDTA、巰基化合物等抑制，在缺乏其他共存的耐藥機制時，產IMP型碳青霉烯酶的菌株仍對單環類抗菌藥物（ATM等）敏感。

實驗室檢測碳青霉烯酶的方法眾多。主要包括改良Hodge試驗、Carba NP試驗、改良碳青霉烯滅活試驗（modified carbapenem inactivation method，mCIM）、酶抑制劑增強試驗、免疫金標試驗以及分子生物學方法等。免疫診斷試劑是體外診斷試劑中發展最快的的細分領域，利用抗原與抗體之間的特異性結合進行定性或定量檢測。

發明內容

本發明提供一種抗IMP型碳青霉烯酶雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用。

本發明采用的技術方案是：一種抗IMP型碳青霉烯酶雜交瘤細胞株，命名為1AA4，保藏編號為CGMCC No.20288；或者命名為AH9，保藏編號為CGMCC No.20287。

一種抗IMP型碳青霉烯酶抗體，命名為抗體1AA4，包括輕鏈可變區和重鏈可變區，輕鏈可變區序列的CDR區中包括如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的三個序列，重鏈可變區序列的CDR區中包括如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的三個序列；

SEQ ID NO:1

RSSQSLLDSGGKTYLN（CDRL1）

SEQ ID NO:2

YLVSKL（CDRL2）

SEQ ID NO:3

FQYTHFPQCT（CDRL3）

SEQ ID NO:4

AASGFTFSDYYMY（CDRH1）

SEQ ID NO:5

VAIISDGGSYTYYPDSVKG（CDRH2）

SEQ ID NO:6