[發明專利]一種用于檢測新型冠狀病毒COVID-19的引物組及試劑盒

有效

• 申請號: 202110165813.6
• 申請日: 2021-02-07
• 公開（公告）號: CN112501359B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 申冕;鄭實;趙曼曼;張清儀;吳亞會
• 申請（專利權）人: 吳江近岸蛋白質科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種用于檢測冠狀病毒的引物組及試劑盒，所述引物組包括以下中的一對或多對：外側引物對：所述外側引物對包括如SEQ ID NO:1所示的上游引物F3和如SEQ ID NO:2所示的下游引物B3；內側引物對：所述內側引物對包括如SEQ ID NO:3所示的上游引物FIP和如SEQ ID NO:4所示的下游引物BIP；環引物對：所述環引物對包括如SEQ ID NO:5所示的上游引物LF和如SEQ ID NO:6所示的下游引物LB。試劑盒包括所述引物組。本發明在一個管中整合了RT?LAMP和CRISPR，能依據兩次顏色變化檢測病毒和各種靶標核酸。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種用于檢測新型冠狀病毒COVID-19的引物組及試劑盒。

背景技術

靶標核酸的快速檢測對于臨床診斷與生物技術應用非常重要，特別是體外分子診斷中，隨著核酸分子檢測市場的快速發展，傳統核酸檢測技術，如熒光定量PCR作為分子診斷技術的金標準之一，雖然提高了效率和準確性，但很難在這么短的時間內檢測到大量樣品，也需要專業人員、操作時間長和昂貴的設備來檢測，使得即時醫療測試和現場分析變得充滿挑戰，也對核酸檢測技術不斷提出新的需求。在這種情況下一種可在采樣現場進行的、利用便攜式分析儀器及配套試劑快速得到檢測結果的即時檢測(point-of-care testing，POCT)技術不斷涌現。目前POCT技術廣泛應用于臨床檢驗、慢病監測、災害醫學救援、傳染病監測、食品安全等公共衛生領域。

反轉錄環介導的等溫擴增（reverse transcription loop-mediated isothermalamplification, RT-LAMP）反應具有很高的特異性，不依賴于昂貴的專業檢測設備，不需要熱循環過程，該方法簡便易操作、實驗流程簡單快速，不具備專業技能的一般人員就能在疾病現場進行快速診斷。但這些方法存在一些缺點，包括假陽性率高、容易造成環境氣溶膠污染，難以將這些技術用于大流行病如COVID-19的有效POC診斷。

隨著簇狀規則間隔的短回文重復序列（CRISPR）和CRISPR相關（Cas）蛋白的最新進展刺激了CRISPR技術在分子診斷中的發展。CRISPR-Cas系統作為核酸檢測工具的一個誘人的特點是它們在識別和切割特定靶標后具有針對單鏈DNA（ssDNA）或RNA靶標的強大的附帶活性，即識別出它們的DNA靶標后，激活的CRISPR-Cas核酸酶會不加區別地裂解附近的單鏈非靶向核酸；接下來結合核酸擴增，擴增產物將觸發CRISPR-Cas核酸酶進行報道分子的側切裂解，以實現更高的敏感性和高度特異性。盡管這些系統有望開發出有效的診斷程序，但將這些技術用作適合大規模的POC診斷程序仍具有挑戰性。

基于RT-LAMP方法和CRISPR的診斷方法的效率和簡便性，通過將RT-LAMP與CRISPR結合可在短時間內在單一溫度下對目標核酸的幾個拷貝進行高特異性診斷。但這也具有局限性，例如兩個單獨的反應步驟，較長的孵育時間或用于模板檢測受限的信號較弱，尤其是當前LAMP-CRISPR結合策略需要克服諸如無上限操作，容易形成氣溶膠污染和操作復雜等諸多缺點。這限制了其開展現場快速檢測的需求。因此，本領域迫切需要開發一種快速、價格適中、無需設備、敏感、高特異、裸眼可視化的且適用于現場即時診斷靶標核酸的方法。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種用于檢測新型冠狀病毒COVID-19的引物組及試劑盒，用于解決現有技術中的問題。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供一種用于檢測冠狀病毒的引物組，所述引物組包括以下中的一對或多對：

1）外側引物對：所述外側引物對包括如SEQ ID NO:1所示的上游引物F3和如SEQID NO:2所示的下游引物B3；

2）內側引物對：所述內側引物對包括如SEQ ID NO:3所示的上游引物FIP和如SEQID NO:4所示的下游引物BIP；