[發明專利]一種用于診斷或防治金黃色葡萄球菌感染的α溶血素抗原表位肽及其應用

有效

• 申請號: 202110163653.1
• 申請日: 2021-02-05
• 公開（公告）號: CN112851770B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 趙卓;章金勇;曾浩;鄒全明;劉智勇;宋旭;陳致富;段連禮;茍強;熊青山
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫大學
• 主分類號: C07K14/31
• 分類號: C07K14/31;C07K19/00;C08G69/36;G01N33/569;A61K38/16;A61P31/04
• 代理公司: 重慶志合專利事務所(普通合伙) 50210
• 代理人: 胡榮琿

本發明公開了本發明提供了一種用于診斷或防治金黃色葡萄球菌感染的抗原表位肽，包含氨基酸序列為SEQ ID NO:1的多肽，本發明還提供了該抗原表位肽在制備用于診斷、預防或治療金黃色葡萄球菌感染中的應用。本發明通過篩選確定了金黃色葡萄球菌溶血素α的抗體優勢表位肽，具有較強的免疫原性，同時該優勢表位肽的氨基酸序列在多種S.aureus菌株中序列保守，因此，也可用于制備金黃色葡萄球菌感染的診斷試劑，或用于其他S.aureus感染的預防或治療。

技術領域

本發明涉及醫療診斷技術領域，具體涉一種用于診斷或防治金黃色葡萄球菌感染的抗原表位肽及其應用。

背景技術

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，S.aureus)作為革蘭氏陽性菌的代表，是一類在自然界廣泛存在的致病性球菌，也是引起醫院感染和社區感染的一種重要致病菌。調查研究表明，在美國，社區皮膚及軟組織感染最常見的病原菌為S.aureus(約占75％)；在日本，膿皰病中S.aureus引發的大皰性膿皰病占的92％；在非洲，熱帶膿性肌炎病原體中S.aureus占55-72％；在中國，感染性心內膜炎的頭號致病菌為S.aureus(占31-34％)。此外，S.aureus感染以急性、化膿性為特征，局部可引起皮膚和軟組織等的化膿性感染，經久不愈；全身可導致骨髓炎、膿毒性關節炎、心內膜炎、肺炎、膿毒血癥等嚴重感染及并發癥，死亡率高達20％。同時，金黃色葡萄球菌的外毒素還可引起食物中毒、燙傷樣皮膚綜合征和中毒性休克綜合征等全身致死性感染。

對于金黃色葡萄球菌感染的治療，通常選用紅霉素、新型青霉素、慶大霉素、萬古霉素或先鋒霉素VI等抗生素。但是由于多重耐藥金黃色葡萄球菌的出現，目前用單一抗生素治療金黃色葡萄球菌感染已經越來越困難。臨床數據顯示，具有多重抗生素耐藥性的金黃色葡萄球菌在社區金黃色葡萄球菌感染中占到60％，而在醫院這一比例占到80％。其中特別突出的是甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌菌株(methicillin-resistant S.aureus,MRSA)，2009年歐洲9個國家MRSA占到臨床金黃色葡萄球菌株的25-50％。MRSA導致的感染用抗生素療法難以治愈并且有很高的致死率。2018年中國MRSA全國平均檢出率為35.0％，居革蘭陽性耐藥菌首位。MRSA侵襲性感染所致菌血癥，90天內死亡率超過50％。目前臨床主要的抗生素治療已無力控制MRSA感染，疫苗研制迫在眉睫。

MRSA致病力強弱主要取決于其產生的毒素和侵襲酶的能力，其中溶血素α(alpha-Hemolysin，Hla)也是金葡菌感染致病的重要外毒素，通常由致病性金葡菌特別是MRSA產生，Hla可通過促使中性粒細胞裂解、損害上皮細胞，引起菌血癥等臨床癥狀，Hla免疫可緩解MRSA流行株所致的皮膚、軟組織壞死及肺炎。通過Blast比對分析，Hla基因序列在已公布的致病性金黃色葡萄球菌中具有高度的保守性，其基因同源性大于90％，因此是理想的疫苗候選抗原。但由于Hla溶血活性強，直接作為疫苗組分可能存在安全性問題。研究證實，第35位的組氨酸(His)在穿孔復合物形成中具有重要作用，對該氨基酸進行定點突變為亮氨酸(Leu)后，可大大降低Hla的溶血活性。因此，本品中的Hla組分為經突變獲得的突變子Hla_H35L，除了降低溶血活性外未發現其他生物學功能改變。

在MRSA的疫苗應答中，抗體應答起主要保護作用。研究證實，不能產生抗毒素中和抗體的人更易發生葡萄球菌感染相關的毒性休克綜合征。由于蛋白抗原發揮其功能主要通過表位來體現特異性。因此，Hla抗原中免疫優勢應答的保護性表位的鑒定，是提升和優化基于Hla抗原的金黃色葡萄球菌疫苗設計的重要前提。篩選Hla的免疫優勢表位，是激發更有效的Hla免疫應答的前提。目前的已知的Hla的B細胞表位，或通過生物信息學軟件推測，或通過單克隆抗體鑒定，或使用人或動物免疫模型中鑒定，該方法均無法鑒定臨床MRSA感染狀態下的人群免疫優勢表位。尚未有全面篩選臨床MRSA感染狀態，參與免疫應答的Hla的優勢表位的報道。因此，建立一種準確有效的篩選及鑒定臨床MRSA感染狀態下，參與免疫應答的Hla的B細胞優勢表位的方法顯得尤為重要。

發明內容