[發明專利]一種Aspergillus tubingensis絕對定量的探針及其應用

有效

• 申請號: 202110163207.0
• 申請日: 2021-02-05
• 公開（公告）號: CN112782145B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 吳群;徐巖;杜如冰
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12Q1/30
• 分類號: C12Q1/30
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 彭素琴

1.一組探針，其特征在于，包括信號探針和淬滅探針；信號探針序列為SEQ ID NO.1所示序列；淬滅探針序列為SEQ ID NO.2所示的序列。

2.檢測試劑盒，其特征在于，含有權利要求1所述的信號探針和淬滅探針。

3.根據權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒還含有如下任意一種或多種：血紅素、緩沖液、2,2-連氮基-雙-(3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽、H₂O₂。

4.一種Aspergillus tubingensis定量方法，其特征在于，所述方法使用了權利要求1所述的探針，或者權利要求2-3任一所述的檢測試劑盒。

5.根據權利要求4所述的定量方法，其特征在于，所述方法包括：待測樣品中DNA發生解鏈；加入過量信號探針，與待測樣本的目標核苷酸片段結合形成雙鏈，使G四鏈體裸漏在序列之外；加入足量淬滅探針與未結合的信號探針形成雙鏈，破壞G四鏈體結構；利用裸漏在外G四鏈體與血紅素反應形成具有過氧化氫酶活性的G四鏈體/血紅素模擬酶，結合過氧化氫酶的活性表征Aspergillus tubingensis的生物量。

6.根據權利要求4所述的定量方法，其特征在于，所述方法為絕對定量或者相對定量；所述方法為絕對定量時，還包括：建立過氧化氫酶活性或者與過氧化氫酶活性呈相關性的指標，與Aspergillus tubingensis的生物量的標準曲線；檢測待測樣品時，將檢測到的過氧化氫酶活性或者與過氧化氫酶活性呈相關性的指標代入標準曲線，即獲得待測樣品中的Aspergillus tubingensis的生物量。

7.根據權利要求5或6任一所述的定量方法，其特征在于，所述待測樣品為含有菌體、基因組或宏基因組的樣品。

8.根據權利要求7所述的定量方法，其特征在于，所述待測樣品為發酵食品或者取自發酵食品發酵過程中的樣品或環境樣本。

9.根據權利要求8所述的定量方法，其特征在于，所述發酵食品為以下任意一種以上：白酒、黃酒、醬油、啤酒、葡萄酒、食醋、發酵茶、傳統發酵蔬菜、發酵飲料、酒精飲品、酸奶、干酪、果醋、酒釀、豆豉、乳腐、發酵米面食品；所述環境樣本選自腸道、土壤、水體。

10.權利要求2-3任一所述試劑盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括：在DNA解鏈的待測樣本中加入過量的信號探針反應一段時間，使信號探針與待測樣本中的目標片段結合；然后再加入足量淬滅探針使之與未結合的信號探針的形成雙鏈；再加入血紅素，反應一段時間后加入ABTS和H₂O₂，反應一段時間，檢測反應物的吸光值，結合吸光值對樣品中Aspergillus tubingensis進行定量。

11.一種檢測發酵食品或環境樣本中Aspergillus tubingensis含量的方法，包括利用權利要求1所述的探針，或者權利要求2-3所述的試劑盒；所述發酵食品為以下任意一種以上：白酒、黃酒、醬油、啤酒、葡萄酒、食醋、發酵茶、傳統發酵蔬菜、發酵飲料、酒精飲品、酸奶、干酪、果醋、酒釀、豆豉、乳腐、發酵米面食品；所述環境樣本選自腸道、土壤、水體。