[發(fā)明專利]煙酰胺單核苷酸的酶促合成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110160981.6
• 申請(qǐng)日: 2021-02-05
• 公開（公告）號(hào): CN112961890B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李釗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳希吉亞生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12P19/30
• 分類號(hào): C12P19/30
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 唐致明

1.煙酰胺單核苷酸的酶促合成方法，其特征在于，包括以下步驟：

S0：以胞苷酸為原料，在胞苷酸水解酶催化作用下，生成核糖-5-磷酸；

S1：以所述核糖-5-磷酸、胞苷酸、多聚磷酸鹽、煙酰胺為原料，在磷酸核糖焦磷酸化酶、多聚磷酸激酶和煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶催化作用下，生成煙酰胺單核苷酸；

其中，所述磷酸核糖焦磷酸化酶的核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示，所述多聚磷酸激酶的核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示，所述煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的核苷酸序列如SEQ?IDNo.4所示，所述胞苷酸水解酶的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示，所述胞苷酸水解酶、所述磷酸核糖焦磷酸化酶、所述多聚磷酸激酶和所述煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的酶活力比例為1：(2-3)：(2-3)：1；

S0中，所述胞苷酸的濃度為100～150mM，所述胞苷酸水解酶的添加量為400～600U/L；

S1中，所述煙酰胺的濃度為100～150mM，所述多聚磷酸鹽的濃度為60～80mM，所述胞苷酸的濃度為2～6mM，所述磷酸核糖焦磷酸化酶的添加量為1000～1500U/L，所述多聚磷酸激酶的添加量為1000～1500U/L，所述煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的添加量為400～600U/L，S1的反應(yīng)溫度為35～37℃，反應(yīng)pH為7.2～7.8，反應(yīng)時(shí)間為8～12h。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶促合成方法，其特征在于，S1中還添加有Mg²⁺。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶促合成方法，其特征在于，S1中Mg²⁺的濃度為50～100mM。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶促合成方法，其特征在于，S1后還包括S2：酶促反應(yīng)結(jié)束后，調(diào)節(jié)pH至7以下，除去沉淀。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的酶促合成方法，其特征在于，調(diào)節(jié)pH至2以下。