[發(fā)明專利]一種體外快速檢測新型冠狀病毒的方法及應用

在審

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• 申請日: 2021-02-08
• 公開（公告）號: CN112782401A
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發(fā)明（設計）人: 曹雪松
• 申請（專利權）人: 聊城大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 青島致嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 37236
• 代理人: 高維波

本發(fā)明涉及一種體外快速檢測新型冠狀病毒（SARS?CoV?2）的方法及其應用。所述的方法可特異性地檢測新型冠狀病毒的刺突蛋白（Spike protein,簡稱S蛋白），即病毒活體。其優(yōu)點表現在：1.具有高特異性、高靈敏度和較高的穩(wěn)定性；2.所需設備及操作簡單，非專業(yè)人員即可操作，便于推廣；3.可實現即時檢驗（POCT）及觀察結果的可視化，特別是既可針對單人采樣檢測，又可在設備上進行高通量、大規(guī)模篩查新型冠狀病毒感染者或攜帶者；4.特別重要的是，所需試劑可按照常規(guī)技術大規(guī)模生產，便于開發(fā)試劑盒大規(guī)模推廣應用。

技術領域

本發(fā)明涉及分子生物學和有機化學領域，具體來說，是一種利用熒光標記多肽探針在體外快速檢測新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)的方法及其應用。

背景技術

自新型冠狀病毒爆發(fā)并引發(fā)全球流行和傳播以來，開發(fā)特異性、高靈敏性和操作簡單的檢測技術始終是有效防控新冠病毒的首要保障。目前用于檢測新型冠狀病毒的技術有二類，一是核酸檢測法，包括逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)、逆轉錄環(huán)介導等溫擴增法(RT-LAMP)和一體化雙重CRISPR-Cas12a(All-in-One Dual CRISPR-Cas12a AIOD-CRISPR)等技術。雖然這類技術具有較高的靈敏性、特異性以及相對較低的假陽性率、假陰性率，并且是目前檢測病毒的金標準和應用最廣泛的技術，但對檢測設備或平臺要求較高，高靈敏度的RT-PCR儀價格昂貴，對實驗室的潔凈度和操作人員要求也較高，而且必須由專業(yè)人員(或經過培訓)進行操作。此外，核酸檢測耗時較長，考慮到樣本運輸、樣本積壓的情況，通常最快24小時才可以出報告結果,很難開展即時檢驗(POCT),因此，存在操作繁瑣、耗時長、需要集中送檢等限制，還不能滿足當前快速增長的大量疑似患者、無癥狀感染者等排查診斷的檢測需求；另一類新型冠狀病毒檢測技術是抗體檢測法(又稱血清學檢測)，目前臨床中常用的抗體血清學檢測方法有3種：酶聯(lián)免疫吸附試驗法、化學發(fā)光免疫分析法、膠體金免疫層析法。抗體檢測試劑是檢測血清中由病毒進入人體后刺激免疫細胞產生的IgM或IgG抗體，IgM抗體出現較早，IgG抗體出現較晚。病毒抗原檢測主要是檢測病毒表面的一些蛋白質。其優(yōu)點是可實現快速、大規(guī)模批量操作，且可降低醫(yī)務人員在呼吸道樣本采集過程中的暴露風險。速度快、易操作、不依賴專業(yè)實驗室及專業(yè)人員。但其缺點是，對于輕癥、無癥狀感染者，其檢測敏感度和特異性均顯著降低，并且從病毒感染到抗體產生均存在窗口期，因此其檢測往往滯后，不能用于早期篩查感染者，另外抗體的制備周期較長，限制了其大規(guī)模的生產。

鑒于新型冠狀病毒感染病例、疑似病例和無癥狀感染者人數的快速增加，迫切需要研發(fā)一種快速、準確、靈敏度高、特異性強和操作簡單的檢測技術，特別是能夠滿足即時檢驗(POCT)，即能夠檢測活病毒的存在，這對于無癥狀和早期感染者的篩查及早發(fā)現、早隔離、早治療等都具有十分重要的意義。而目前尚未見具有綜合了以上特點的新冠病毒檢測技術及其試劑盒的報道及其應用。