[發明專利]一種BTEX降解菌及其篩選方法和應用

有效

• 申請號: 202110153396.3
• 申請日: 2021-02-04
• 公開（公告）號: CN112899192B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 崔長征;張磊;李瑩瑩;單廣波;袁波;張峰;陳欣;劉勇弟;林匡飛;羅啟仕
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C02F3/34;B09C1/10;C02F101/32;C12R1/01
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 劉燕武

本發明涉及一種BTEX降解菌及其篩選方法和應用，所述降解菌為有益桿菌屬，命名為Diaphorobacter sp.ED?3，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO.M 2021059，所述篩選方法包括取污染土壤樣品于密閉血清瓶中，經馴化、分離和純化后獲得；ED?3菌能在60h內完全降解100mg/L的乙苯，無毒性中間產物代謝積累，無二次污染物的產生；該菌同時能夠降解苯、甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯和對二甲苯。該菌為非致病菌，降解效果穩定；該操作成本較低，對環境產生的負面影響小，具有很好的開發利用前景。

技術領域

本發明屬于微生物處理降解技術領域，涉及一種BTEX降解菌及其篩選方法和應用。

背景技術

苯，甲苯，乙苯和二甲苯(Benzene,Toluene,Ethylbenzene,and Xylene,BTEX) 不僅作為化工原料在塑料、農藥的合成中有廣泛使用，也是原油和石油產品的重要組成成份，由于相關儲罐及地下管道的泄漏經常會導致土壤和地下水被污染。 BTEX具有明顯的“三致”效應，許多國家將其列為優先控制污染物。近年來BTEX 在農藥、石化等污染土壤和地下水中頻繁檢出，且濃度高、易揮發，尤其開挖、運輸和治理等異位修復過程中會產生二次污染，該類污染土壤與地下水的微生物原位修復備受關注。

生物治理技術經過發展，在環境治理上取得了長足的進步，開發了許多新技術，例如生物強化技術、生物刺激技術。生物強化技術產生于上世紀70年代中期，80 年代以來得以廣泛的研究和應用。此技術旨在提高生物處理系統的處理能力，向該系統中投加從自然界中篩選的優勢菌種或通過基因組合技術產生的高效菌種，以去除某一種或某一類有害物質，以強化生物量對某一特定環境或特殊污染物的反應。而實施生物強化的關鍵條件就是獲得針對目標污染物的高效降解菌。

發明內容

本發明的目的就是為了提供一種BTEX降解菌及其篩選方法和應用，以克服上述技術存在對土壤及水體環境造成破壞，對低濃度乙苯污染物去除不夠徹底，需要高成本，并且容易造成二次污染等問題。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

一方面，本發明提出了一種BTEX降解菌，其為有益桿菌屬，命名為Diaphorobactersp.ED-3，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址：中國.武漢.武漢大學，保藏編號為CCTCC NO. M 2021059，保藏時間為2021年1月14日。

進一步的，其革蘭氏染色呈陰性，菌株形態無莢膜、桿菌，且在Luria-Bertani 培養基上菌落形態規則，呈黃色、凸起、不透明和光滑。同時，對其進行了16S rDNA 測序，所測得的16S rDNA序列進行BLAST比對，比對結果顯示，菌株ED-3的 16S rDNA的核苷酸序列與有益桿菌屬(Diaphorobacter sp.)不同菌株的核苷酸序列有大于99％的同源性。

另一方面，本發明還提出了一種BTEX降解菌的篩選方法，包括以下步驟：

(1)將基礎無機鹽培養基、微量元素混合液和乙苯溶液混合，得到液體培養基；

(2)取來源于農藥廠污染土壤的土壤樣品置于一份液體培養基中，混合，得到含菌的第一混合液，培養后移取10％的第一混合液(此處為體積量)再轉移至另一份液體培養基中，得到第二混合液，如此重復若干次，直至得到第n混合液，其中，n＝5-8；

(3)將所得第n混合液進行劃線分離培養，即得到BTEX降解菌。