[發明專利]一種通過組合色對基因組多位點同時檢測的原位雜交方法

在審

• 申請號: 202110152362.2
• 申請日: 2021-02-03
• 公開（公告）號: CN112921074A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 張智慧;閆科技
• 申請（專利權）人: 鯤羽生物科技（江門）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6841
• 分類號: C12Q1/6841
• 代理公司: 北京捷誠信通專利事務所(普通合伙) 11221
• 代理人: 萬善書

本發明涉及分子生物學技術應用領域，具體為一種通過組合色對基因組多位點同時檢測的原位雜交方法，包括步驟：S1、制備雜交探針：合成引物片段，并對所述探針進行熒光標記；所述的熒光標記包括組合色熒光標記；S2、雜交：制備雜交片，將所制得的雜交片與S1中經過熒光標記的雜交探針進行雜交反應；S3、成像，獲取標記信息。本發明的原位雜交法提高了檢測的準確率，并且大大的增加了檢測位點的數目，只需要一輪雜交。就可以同時對至少五種基因位點進行檢測，大大的增加檢測的效率，使操作更加的簡便快捷，擴大了應用范圍。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術應用領域，具體為一種通過組合色對基因組多位點同時檢測的原位雜交方法，是一種多色熒光原位檢測方法的應用。

背景技術

原位核酸分子雜交技術簡稱原位雜交(in situ hybridization ISH)是應用已知堿基順序并帶有標記物的核酸探針與組織、細胞中待檢測的核酸按堿基配對的原則進行特異性結合而形成雜交體，然后再應用與標記物相應的檢測系統，通過組織化學或免疫組織化學方法在被檢測的核酸原位形成帶熒光的雜交信號，在顯微鏡或電子顯微鏡下進行細胞內定位。這一技術為研究單一細胞中DNA和編碼各種蛋白質、多肽的相應mRNA的定位提供了手段，使從分子水平研究細胞內基因表達及有關基因調控提供了有效的工具。可視為組織化學或免疫細胞化學中革命性的突破。原位雜交技術已應用于基礎研究如基因組圖(Genemapping)，轉基因檢測，基因表達定位(localization of gene expression)，核DNA和RNA的mRNA的排列和運輸(arrangement and transport of mNA)，復制(replication)和細胞的分類(Sorting of cells)。臨床研究應用在細胞遺傳學(Cytogenetics)，產前診斷(Prenatal diagnosis)，腫瘤和傳染性疾病的診斷，生物學劑量測定(biologicaldosimetry)和病毒學的病原學診斷等。隨著核酸探針的制備,標記方法和基本操作方法的不斷改進，新的技術不斷涌現，相信在不久的將來，原位雜交技術將會更廣泛的被應用于各個學科，并不斷為生命科學提供新的資料，開拓新的領域。

腫瘤疾病的發生、發展過程中，腫瘤細胞往往會出現染色體、基因等發現異常變化，包括基因變異、基因多拷貝、染色體非整倍性等。FISH(熒光原位雜交，Fluorescence insitu hybridization)能通過檢測染色體和基因的異常變化，供某些腫瘤的預后或者診斷參考，例如實體瘤中的宮頸癌、非小細胞肺癌、乳腺癌和膀胱癌等，以及血液腫瘤中的慢性粒細胞性白血病、多發性骨髓瘤、慢性淋巴細胞性白血病等疾病。

FISH技術也有其局限性，首先它只能用特異的探針檢測已知的染色體異常，其次一種探針往往只能檢測出一種異常，對同時存在的多種異常需采用多個探針檢測，成本勢必增加。

目前的熒光原位雜交法，一張雜交片最多實現三種顏色熒光。在實際操作中，DAPI一般用來標記細胞核，因此對于普通熒光顯微鏡來說，一張雜交片只能同時實現紅光和綠光兩種檢測，即一張雜交片檢測兩種不同的基因或者染色體。如果雜交更多的基因，則需要另外增加雜交片或者另外配備其他熒光色，增加了操作人員的工作量，同時也提高了檢測成本。另外，現有的熒光原位雜交法，通常是一張雜交片子只能檢測一種目的基因，如果同時需要檢測多種基因，也可選擇進行多輪雜交。多輪雜交在同一張雜交片前一次雜交、檢測結束后，需要進行清洗后再雜交、檢測，如此循環實現檢測多種基因的目的。目前，多輪雜交的過程中普遍存在清洗不徹底的情況，對后續檢測帶來干擾，影響檢測結果的準確性，同時多輪雜交的時間周期很長，大大減低了基因檢測的效率。

發明內容

基于此，本發明的目的在于，提供一種通過組合色對基因組多位點同時檢測的原位雜交方法。本發明的原位雜交法提高了檢測的準確率，并且大大的增加了檢測位點的數目，只需要一輪雜交。就可以同時對至少五種基因位點進行檢測，大大的增加檢測的效率，使操作更加的簡便快捷，擴大了應用范圍。

本發明的技術方案如下：