[發明專利]結合人B7-H4蛋白的適配體及其應用和應用其的檢測方法

有效

• 申請號: 202110152091.0
• 申請日: 2021-02-04
• 公開（公告）號: CN112779261B
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發明（設計）人: 葛科立;趙娜;葛銀林;于曉霞;張金玉;薛美蘭
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/569;G01N33/574
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產權代理有限公司 11624
• 代理人: 張旭東

本發明提供了結合人B7?H4蛋白的2條核酸適配體及其應用和應用其的檢測方法，涉及生物醫學技術領域。該結合人B7?H4蛋白的核酸適配體4s?7和4s?2能夠與腫瘤蛋白B7?H4特異性結合，具有如SEQ ID NO.1或NO.2所示序列，具有精確識別、無免疫原性、易體外合成與修飾等優點。緩解了現有技術中存在的缺少一種能夠靶向腫瘤蛋白B7?H4的核酸適配體的技術問題。

技術領域

本發明涉及分子生物醫學技術領域，尤其是涉及一種結合人B7-H4蛋白的核酸適配體及其應用和應用其的檢測方法。

背景技術

惡性腫瘤嚴重影響著人們的健康和生命，是全球第二大致死病因。隨著人口增長和人們不健康的生活方式導致患癌癥風險增加。大部分惡性腫瘤發現時已經進入中晚期，錯過了最佳治療時機。腫瘤在發病早期可以通過手術、藥物等手段獲得較好的治療效果，因此實現腫瘤的早期診斷和精準治療可提高治療效果及患者生存率。細胞內基因突變的積累，細胞分裂異常和抗凋亡現象增加是癌癥發生的已知因素，這些變化使得突變細胞獲得表達正常細胞不表達的某些蛋白質的能力。這些腫瘤特異性蛋白是腫瘤診斷和精準治療的重要靶標。傳統的腫瘤診斷滯后病情，大多數病人在腫瘤發現時，其病情已經進入中晚期。因此，近年來人們更加重視改進腫瘤治療方法、研究腫瘤的早期檢測和診斷方法。目前，腫瘤的分子生物學研究受到關注，成為研究熱點。其中，通過分子生物學方法尋找對腫瘤靶標高特異性，高親和力的核酸適配體，為腫瘤的早期診斷和精準治療提供了一種新的思路和方法。

B7-H4，也稱為B7x，B7S1或者VTCN1，屬于B7家族成員，首先由三個獨立的實驗室通過生物信息學分析發現，后來通過分析B7-H4 mRNA及B7-H4蛋白的表達證明其存在于人體漿液性卵巢癌和乳腺癌中，而在正常組織中B7-H4蛋白不表達。B7-H4蛋白是一種跨膜蛋白，含有282個氨基酸，包含氨基末端細胞外結構域，疏水性跨膜結構域和非常短的細胞內結構域(僅由兩個氨基酸殘基組成)。與其他B7家族成員一樣，B7-H4蛋白在其細胞外結構域中含有1個IgV和1個IgC區，具有I型跨膜蛋白的完整結構。

B7家族成員可與靶細胞表面相應受體結合，激活或抑制T細胞免疫應答。研究表明，B7-H4蛋白作為B7家族的新成員，能夠與T細胞表面受體結合，抑制T細胞增殖、活化和細胞周期的進程，實現對T細胞免疫應答的負性調控，從而促進腫瘤細胞的免疫逃逸，導致了腫瘤的惡化和轉移。目前研究表明人類腫瘤細胞表面過表達B7-H4蛋白的主要有乳腺癌，卵巢癌等，而B7-H4蛋白在正常細胞中不表達。B7-H4蛋白過表達抑制T細胞免疫應答，使得腫瘤逃避機體的免疫監控和殺傷。

核酸適配體(Aptamer)是一類具有特定結構的單鏈DNA或RNA，其長度一般為20～80個堿基。利用指數富集的配基系統進化(systematic evolution of ligands byexponential enrichment,SELEX)技術，可從隨機單鏈核酸序列庫中篩選出與靶標特異性結合的核酸適配體。核酸適配體相對分子質量小、易穿透細胞膜、性質穩定、容易制備和修飾、無免疫原性、成本低、便于保存運輸；其結合的靶標范圍廣，包括離子、小分子、蛋白質、細胞和微生物等；其親和力可與抗體相當，親和常數可達納摩爾或皮摩爾水平。核酸適配體與抗體作用相似，但又優于抗體，可為惡性腫瘤的早期診斷和精準治療提供了一種全新有效的方法和手段。因此，近年來核酸適配體受到科學家的廣泛關注，其在基礎、臨床、藥物開發中的研究不斷增多。

分子靶向治療是腫瘤治療領域發展的新方向，相比傳統的治療手段，分子靶向治療具有更好的分子靶向性，能選擇性地殺傷腫瘤細胞，減少對正常組織的損傷，不易產生耐藥，安全性和耐受性好。