[發(fā)明專利]紫色紅曲菌comp54338_c3基因過表達(dá)菌株構(gòu)建方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110150855.2
• 申請(qǐng)日: 2021-06-09
• 公開（公告）號(hào): CN113151338B
• 公開（公告）日: 2023-02-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張嬋;王成濤;孫寶國
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京工商大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/80
• 分類號(hào): C12N15/80;C12N1/15;C12N15/31;C12R1/645
• 代理公司: 北京知企鴻蒙專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11692
• 代理人: 劉帥帥

本發(fā)明公開了紫色紅曲菌comp54338_c3基因過表達(dá)菌株的構(gòu)建方法，包括菌種培養(yǎng)、過表達(dá)載體構(gòu)建、過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化等步驟。本發(fā)明成功克隆出紫色紅曲菌M1菌株中的comp54338_c3基因，驗(yàn)證其存在，并將該基因與過表達(dá)質(zhì)粒pBARGPE1?Hygro連接，導(dǎo)入紅曲菌M1菌株中，成功構(gòu)建了過表達(dá)工程菌株c3?7。通過對(duì)比過表達(dá)comp54338_c3基因的c3?7菌株和M1菌株的次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量、菌絲生物量、菌絲體形態(tài)等相關(guān)生理指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，下調(diào)基因comp54338_c3基因的過表達(dá)會(huì)降低紅曲菌中Monacolin K和三種紅曲色素的產(chǎn)量，抑制紅曲菌菌絲體的生長發(fā)育導(dǎo)致菌絲生物量也相應(yīng)降低，并在一定程度上改變了菌絲體的形態(tài)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種紫色紅曲菌comp54338_c3基因過表達(dá)菌株的構(gòu)建方法，屬于生物基因工程領(lǐng)域。

背景技術(shù)

紅曲菌又稱“紅曲霉”，是一種腐生真菌，在真菌分類學(xué)上屬于真菌門，子囊菌亞門，不整子囊菌綱，紅曲菌科，紅曲霉屬。紅曲菌作為重要的食用和藥用真菌之一，可產(chǎn)生多種次級(jí)代謝產(chǎn)物，包括Monacolin K、紅曲色素、桔霉素、γ-氨基丁酸以及麥角固醇等，其中大部分被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。Monacolin K又稱“洛伐他汀”，是紅曲菌產(chǎn)生的一種具有生理活性的聚酮類物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，Monacolin K具有抑制膽固醇合成途徑中的關(guān)鍵酶HMG-CoA還原酶(3-羥基-3-甲基-戊二酰輔酶A還原酶)活性的作用，進(jìn)而能夠有效的抑制膽固醇合成，因此，Monacolin K被國內(nèi)外視為降膽固醇的理想藥。

本發(fā)明的申請(qǐng)人實(shí)驗(yàn)室前期利用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)紫色紅曲菌M1的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了52個(gè)轉(zhuǎn)錄因子和27個(gè)靶基因，對(duì)其中的5個(gè)轉(zhuǎn)錄因子和5個(gè)靶基因進(jìn)行了基因功能的預(yù)測(cè)并獲得了相關(guān)的基因信息。由于紅曲菌生物合成及分解代謝過程繁雜，Monacolin K具體調(diào)控機(jī)制還未完全清晰，可對(duì)上述轉(zhuǎn)錄因子和靶基因進(jìn)行基因克隆、功能驗(yàn)證等工作，以期獲得紅曲菌次級(jí)代謝產(chǎn)物合成過程中的關(guān)鍵調(diào)控因子。

本發(fā)明選取轉(zhuǎn)錄組測(cè)序所得到的一個(gè)下調(diào)基因comp54338_c3進(jìn)行基因克隆，并構(gòu)建該基因過表達(dá)工程菌株，探究目的基因的過表達(dá)對(duì)紅曲菌Monacolin K的合成、紅曲色素的合成、菌絲體形態(tài)、生物量及相關(guān)基因表達(dá)量的影響。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供紫色紅曲菌comp54338_c3基因過表達(dá)菌株的構(gòu)建方法。

comp54338_c3基因序列如下：