[發明專利]一種界面增敏型檢測試劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110150111.0
• 申請日: 2021-02-03
• 公開（公告）號: CN112945923A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 許宙;程云輝;張林威;李青霞;陳茂龍;丁利;焦葉;文李;李虹輝
• 申請（專利權）人: 長沙理工大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 長沙智路知識產權代理事務所(普通合伙) 43244
• 代理人: 曲超

1.一種界面增敏型檢測試劑，其特征在于，包括載有第二抗體的熒光傳感器、酶標抗原、酶的底物和第一抗體，所述熒光傳感器以UCNPs作為能量供體、異硫氰酸熒光素作為能量受體，能量供體和能量受體之間通過共價鍵結合；所述酶和酶的底物分別為乙酰膽堿酯酶和乙酰膽堿。

2.根據權利要求1所述的界面增敏型檢測試劑，其特征在于，所述UCNPs為NaYF₄:Yb³⁺,Tm³⁺。

3.權利要求1或2所述的界面增敏型檢測試劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、制備載有第二抗體的熒光傳感器；

S2、制備酶標抗原；

S3、將載有第二抗體的熒光傳感器與酶的底物溶液混合，然后加入酶標抗原溶液和第一抗體，即制成所述界面增敏型檢測試劑。

4.根據權利要求3所述的界面增敏型檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述載有第二抗體的熒光傳感器的制備包括以下步驟：

S11、制備油酸修飾的UCNPs；

S12、通過配體交換法制備水溶性UCNPs；

S13、制備以UCNPs為能量供體、異硫氰酸熒光素為能量受體的熒光傳感器；

S14、制備載有第二抗體的熒光傳感器。

5.根據權利要求4所述的界面增敏型檢測試劑的制備方法，其特征在于，步驟S11中，具體為：將YCl₃·6H₂O、YbCl₃·6H₂O、TmCl₃·6H₂O、OA、1-ODE加入到反應容器中，在氮氣保護下升溫至150℃，抽真空除去反應溶液中的水分，繼續升溫至160℃并恒溫反應直至溶液澄清透明，降溫至室溫；將NaOH、NH₄F溶解在甲醇溶液中配制A溶液，室溫下將A溶液滴入所述反應容器中混合均勻，升溫至100℃除去多余的甲醇氣體，再升溫至300℃反應，反應完成后冷卻至室溫，將乙醇溶液和環己烷溶液混合加入反應液中，離心得到油酸修飾的UCNPs。

6.根據權利要求4所述的界面增敏型檢測試劑的制備方法，其特征在于，步驟S12中，具體為：將所述油酸修飾的UCNPs分散在氯仿溶液中，然后將PAA分散在乙醇溶液中，最后，將含有油酸修飾的UCNPs的氯仿溶液滴加到PAA分散的乙醇溶液中，避光反應得到PAA修飾的UCNPS；將所述PAA修飾的UCNPs分散在超純水中，將PAH溶解在乙醇溶液中，在超聲條件下將PAA修飾的UCNPs溶液滴加入含PAH的乙醇溶液中進行反應，得到水溶性UCNPs。

7.根據權利要求4所述的界面增敏型檢測試劑的制備方法，其特征在于，步驟S13中，具體為：將PAH修飾的UCNPs分散在超純水中，將FITC溶解在無水乙醇溶液中，將FITC乙醇溶液加入PAH修飾的UCNPs溶液中，室溫下避光進行反應，得到所述熒光傳感器。

8.根據權利要求4所述的界面增敏型檢測試劑的制備方法，其特征在于，步驟S14中，具體為：將所述熒光傳感器分散在PBS溶液中，將第二抗體分散在抗體稀釋液中，將含有所述熒光傳感器的PBS溶液滴加入含有第二抗體的抗體稀釋液中，之后加入EDC溶液和NHS溶液，室溫下反應得到載有第二抗體的熒光傳感器。

9.權利要求1或2所述的界面增敏型檢測試劑或者權利要求3-8任一項所述的制備方法制得的界面增敏型檢測試劑在檢測黃曲霉素的應用。