[發(fā)明專利]用于構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)的接頭和測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110147807.8
• 申請(qǐng)日: 2018-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN112852802A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許明炎;張曉妮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳海普洛斯醫(yī)療器械有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/6806;C40B50/06;C40B40/06
• 代理公司: 深圳舍穆專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 44398
• 代理人: 黃賢炬

1.一種用于構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)的接頭，其特征在于：通過第一核苷酸單鏈與第二核苷酸單鏈部分結(jié)合而形成，所述第一核苷酸單鏈包括第一通用引物序列、第一測(cè)序引物序列和位于所述第一通用引物序列與所述第一測(cè)序引物序列之間的單分子標(biāo)簽，所述第二核苷酸單鏈包括第二通用引物序列、與所述第一測(cè)序引物序列部分互補(bǔ)的第二測(cè)序引物序列和位于所述第二通用引物序列與所述第二測(cè)序引物序列之間的樣本標(biāo)簽，所述第一通用引物序列為AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC，所述第一測(cè)序引物為ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT，所述第二通用引物序列為ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG，所述第二測(cè)序引物為GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC。

2.如權(quán)利要求1所述的接頭，其特征在于：

所述單分子標(biāo)簽為用于標(biāo)記不同DNA片段的隨機(jī)的堿基序列。

3.如權(quán)利要求1所述的接頭，其特征在于：

所述樣本標(biāo)簽為用于區(qū)別不同樣本的固定的堿基序列。

4.如權(quán)利要求1或2所述的接頭，其特征在于：

所述單分子標(biāo)簽的長(zhǎng)度為4bp至20bp。

5.如權(quán)利要求1或3所述的接頭，其特征在于：

所述樣本標(biāo)簽的長(zhǎng)度為4bp至20bp。

6.如權(quán)利要求1所述的接頭，其特征在于：

所述第一核苷酸單鏈與所述第二核苷酸單鏈通過退火而部分結(jié)合，所述第二核苷酸單鏈的5’端經(jīng)磷酸基團(tuán)修飾。

7.如權(quán)利要求1所述的接頭，其特征在于：

所述接頭為Y字型接頭，所述第一測(cè)序引物與所述第二測(cè)序引物部分結(jié)合。

8.如權(quán)利要求1或7所述的接頭，其特征在于：

所述單分子標(biāo)簽和所述樣本標(biāo)簽分別位于所述接頭未結(jié)合部分，所述第一通用引物序列和所述第二通用引物序列位于所述接頭未結(jié)合部分末端。

9.一種測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建方法，其特征在于，

包括：

(a)提取DNA；

(b)將DNA進(jìn)行片段化處理；

(c)對(duì)所獲得的DNA片段進(jìn)行末端修復(fù)和加A尾；

(d)在步驟(c)所獲得的DNA片段兩端連接含有權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的接頭；

(e)以步驟(d)獲得的DNA接頭連接產(chǎn)物為模板，以兩端接頭的通用引物為正反向引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增并得到PCR產(chǎn)物；以及

(f)進(jìn)行PCR產(chǎn)物純化。

10.如權(quán)利要求9所述的測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建方法，其特征在于：

在所述步驟(f)中，利用磁珠法對(duì)所述PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。