[發(fā)明專利]一株酵母屬菌種及其篩選方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110147608.7
• 申請日: 2021-02-03
• 公開（公告）號: CN112725205B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊榮玲;許寧寧;陳曦;趙祥杰;仝爭;宋毓曄;王朝宇;羅洪鎮(zhèn);何婷婷
• 申請（專利權(quán)）人: 淮陰工學(xué)院
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N1/02;C12P19/44;C12R1/645
• 代理公司: 淮安市科文知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 32223
• 代理人: 廖娜;李鋒

本發(fā)明涉及全細(xì)胞催化領(lǐng)域，公開了一株酵母屬菌種及其篩選方法和應(yīng)用，酵母屬菌種（Limtongozyma cylindracea）SA?X于2020年6月8日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，菌種保藏號為CGMCC No.20048SA?X菌種全細(xì)胞可以在非水相體系催化豆腐果苷的酰化反應(yīng)。該酵母屬菌種在非水相條件下作為全細(xì)胞催化劑，能夠顯著提高豆腐果苷酰化反應(yīng)的催化活性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物及生物化工領(lǐng)域，特別涉及一株能夠在非水相體系中催化豆腐果苷生成酯衍生物的酵母屬菌種及其篩選方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

豆腐果苷作為山龍眼果實(shí)中的主要活性成分，目前已在臨床上用于治療各種疾病，如神經(jīng)衰弱綜合癥、三叉神經(jīng)痛和血管性頭痛等。最近的一些研究發(fā)現(xiàn)，豆腐果苷還具有治療抑郁癥和與黑色素沉著相關(guān)的皮膚病的潛力。然而，豆腐果苷是一種多羥基化合物，脂溶性差，生物利用度較低。研究證明，豆腐果苷酯類衍生物具有比親代化合物更好的生物活性和生物利用度。肉桂酸屬于酚酸類化合物，廣泛存在于自然界中，具有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫等多種生物活性。因此，在保持豆腐果苷原有基本骨架結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上對其進(jìn)行肉桂酸酰化修飾改造，可以獲得生物活性提高且具有良好生物利用度的豆腐果苷酯衍生物。和純酶催化劑相比，使用微生物全細(xì)胞催化劑，避免了純酶制劑繁瑣的制備過程，極大地降低了生物催化的成本，而且全細(xì)胞具有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，給酶提供了一個(gè)天然保護(hù)屏障，可以最大程度地保持酶在有機(jī)溶劑中的構(gòu)象和催化活性。因此篩選一種用于豆腐果苷化合物結(jié)構(gòu)修飾的全細(xì)胞催化劑具有極高利用前景，其中來源于假絲酵母屬的微生物已經(jīng)在生物催化中得到了較多利用，而通過進(jìn)一步定向選育的方法獲得用于豆腐果苷結(jié)構(gòu)修飾的酵母屬菌種具有較高利用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種能夠在非水相體系中全細(xì)胞催化豆腐果苷生成酯衍生物的酵母屬菌種及其篩選方法和應(yīng)用，該酵母屬菌種在非水相條件下作為全細(xì)胞催化劑，能夠顯著提高豆腐果苷酰化反應(yīng)的催化活性。

技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一株酵母屬菌種(Limtongozyma cylindracea)SA-X，于2020年6月8日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，菌種保藏號為CGMCC No.20048。

本發(fā)明還提供了一種酵母屬菌種的篩選方法，包括以下步驟：S1：配制選擇性酵母菌富集培養(yǎng)基、中性紅油脂平板培養(yǎng)基、三丁酸甘油酯培養(yǎng)基、種子液培養(yǎng)基和發(fā)酵液培養(yǎng)基；S2：將在富含油脂的土壤中采集到的土壤樣品，先在無菌蒸餾水中充分振搖溶解，取上清液置于所述選擇性酵母菌富集培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得酵母菌富集培養(yǎng)菌液；S3：用無菌水將所述酵母菌富集培養(yǎng)菌液稀釋后涂布于普通酵母菌培養(yǎng)基平板，挑取不同單菌落在所述中性紅油脂平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，選取發(fā)生紅色顯色的菌落作為初篩菌株進(jìn)行純化；S4：將純化后的所述初篩菌株均勻涂布于普通真菌培養(yǎng)基平板，待菌落布滿平板時(shí)，切取菌落小塊接種于所述三丁酸甘油酯培養(yǎng)基上，將產(chǎn)生透明圈的菌種作為復(fù)篩菌株；S5：將所述復(fù)篩菌株經(jīng)種子液培養(yǎng)基培養(yǎng)后，以2％的接種量接種于所述發(fā)酵液培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得酵母屬菌種的液體種子；S6：培養(yǎng)結(jié)束后，8000r/min離心10min去除發(fā)酵液，用去離子水洗滌濕菌體，冷凍干燥，獲得的凍干菌體即為酵母屬菌種。

優(yōu)選地，所述選擇性酵母菌富集培養(yǎng)基的組成為：0.01％酵母膏、0.05％MgSO₄·7H₂O、1％Na₂HPO₄、0.5％NaCl、0.2％KH₂PO₄、1％-2％混合植物油、0.03％鏈霉素、0.03％放線菌酮。

優(yōu)選地，所述混合植物油由體積比為1:1:5～1:1:10的核桃油、山茶油和橄欖油組成。