[發明專利]以翠竹鞭芽為外植體同時高效生根獲得瓶苗的方法

有效

• 申請號: 202110147578.X
• 申請日: 2021-02-03
• 公開（公告）號: CN113016609B
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 林樹燕;徐薪璐;楊蒙;鄭笑;鄭毅;王星
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙) 32274
• 代理人: 蘇秋麗;邱興天

本發明公開了以翠竹鞭芽為外植體同時高效生根獲得瓶苗的方法，屬于植物組織培養技術領域。該方法采用三年生翠竹實生苗生長健壯植株的竹鞭側芽為外植體；然后將無菌外植體接種在誘導培養基上誘導叢芽；然后經增殖培養得到叢芽；最后采用高效生根培養基能較短時間內獲得大量翠竹生根苗。本發明優化了翠竹組織培養生根叢苗快速繁殖技術，以鞭芽為外植體的翠竹叢芽生根時間相對較短而且根數量較多，縮短了翠竹的組培快繁時間，使翠竹的組培效率大大提高。

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，具體涉及一種以翠竹鞭芽為外植體同時高效生根獲得瓶苗的方法。

背景技術

翠竹(Pleioblastus pygmaeus)竹亞科大明竹屬植物，植株矮小，耐陰，葉片翠綠，且極耐修剪，是一種十分優良的地被類觀賞植物。尤其近年來，地被類竹種以及彩葉竹種在園林綠化上的應用愈來愈廣泛，其經濟價值近年來也逐漸飆高(姚文靜,王茹,林樹燕,王星,楊蒙,鄭毅,丁雨龍.翠竹實生苗生長發育規律及構件生物量模型擬合.南京林業大學學報(自然科學版),2020,44(6):103-110)。但受到繁殖材料的獲得困難及繁殖方法的限制，傳統的繁育方式已無法滿足翠竹日益增大的市場需求，且園林用竹對植物的遺傳構成一致性和植株大小的一致性要求較高。在這樣的背景下，構建高效的翠竹組培快繁再生體系勢在必行。

目前，國內外關于竹子的組織培養已取得了一些進展。自1982年起，國外相繼報道了印度箣竹、勃氏甜龍竹等數十個竹種的組織培養技術研究情況(張春玲.竹子組織培養研究進展.現代園藝,2019,(12):7-8)。我國的竹子組織培養技術研究起步較晚，但經幾代科研工作者的不懈努力，目前麻竹、慈竹、甜龍竹、巨龍竹等重要經濟竹種的組培快繁技術在生產上的應用已經十分成熟。平安竹、菲白竹、鋪地竹等園林觀賞用竹也都已實現了利用試管快繁技術進行批量繁殖(王光萍,丁雨龍,黃敏仁,王明庥.觀賞竹的試管快繁研究.林業科學,2005,41(5):51-55)。由于竹類植物的花和種子不易穩定地獲得，且除種胚外其余外植體類型都很難通過誘導愈傷分化獲得再生植株，所以以單芽為外植體，誘導產生芽叢，經誘導生根后移至土壤，這種不經過脫分化過程直接獲得大量完整植株的繁殖方式應用更為廣泛，有關翠竹組培快繁的文章僅見1篇，其外植體材料為稈芽(張春霞,駱仁祥,丁興萃,白瑞華,田新立,李偉成,吳壽國.翠竹的組織培養和快速繁殖.植物生理學通訊,2010,46(5):477-478.)。鞭芽是竹子出筍成竹、長鞭形成地下根系結構的基礎。至今未見以鞭芽為外植體材料進行竹子組織快繁的報道。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明要解決的技術問題在于提供一種以翠竹鞭芽為外植體同時高效生根獲得瓶苗的方法，該方法以翠竹的鞭芽為試驗材料，嘗試構建翠竹組織培養快繁高效再生技術體系，為翠竹工廠化大規模生產和其園林應用推廣奠定基礎。

為了解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：

以翠竹鞭芽為外植體同時高效生根獲得瓶苗的方法，包括翠竹鞭芽外植體的準備、無菌體系的建立、叢芽誘導及叢芽增殖、叢芽生根后獲得生根苗；其中叢芽誘導培養基為MS+0.1mg·L^-1TDZ+0.5mg·L^-1NAA，叢芽增殖培養基為MS+5mg·L^-16-BA+0.3mg·L^-1NAA；叢芽生根增殖培養基為1/2MS+1mg·L^-16-BA+1.5mg·L^-1NAA+0.5mg·L^-1IBA。

所述以翠竹鞭芽為外植體同時高效生根獲得瓶苗的方法，翠竹鞭芽外植體的準備：以翠竹三年生實生苗生長健壯植株的竹鞭側芽作為外植體材料，將采集的外植體進行預處理后備用；預處理方法為：先將翠竹實生苗竹鞭剪成1.5cm的帶芽鞭段，用洗潔精清洗后，在自來水流水下沖洗24h。

所述以翠竹鞭芽為外植體同時高效生根獲得瓶苗的方法，無菌體系的建立為：處理好的外植體經消毒劑滅菌處理后，無菌水沖洗數次，再用次氯酸鈉消毒，無菌水沖洗數次。