[發明專利]一種核定位信號肽及其序列和應用

有效

• 申請號: 202110147342.6
• 申請日: 2021-02-03
• 公開（公告）號: CN112759626B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 秦曦明;楊禹;張云飛
• 申請（專利權）人: 安徽大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K19/00;C12N15/85
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

本發明公開了一種核定位信號肽及其序列和應用，所述信號肽的序列為PGPIRCRHRSKVS，編碼所述信號肽的基因，得到信號肽的基因序列。所述的信號肽基因序列為5’?CCGGGTCCTATCCGCTGCAGGCATCGATCGAAGGTTTCC?3’。采用多肽作為核定位信號肽將目的蛋白定位于細胞核中，所述多肽序列為PGPIRCRHRSKVS。采用多肽作為核定位信號肽將目的蛋白定位于細胞核核仁中，所述多肽序列為PGPIRCRHRSKVS的2~5個串聯。本發明是一種未被發現的入核信號序列，并且串聯之后可以特異性定位于核仁區域。

技術領域

本發明涉及生物鐘轉錄抑制因子CHRONO蛋白核定位NLS序列，以及該NLS序列在表達載體領域的應用技術領域，尤其涉及一種核定位信號肽及其序列和應用。

背景技術

將外源基因人工導入細胞的轉基因技術是一種重要的技術，不僅僅是一種分析各種生物現象的基本技術，而且因為其在諸如基因治療和有益動物生產方面的應用。

生物鐘系統的核心主要是由BMAL1/CLOCK構成的轉錄激活復合物與轉錄抑制因子PER和CRY構成的負反饋調控環路。在2014年，研究發現這個負反饋環路中還存在另外一個全新的核心生物鐘元件——CHRONO。雖然研究發現CHRONO是一個轉錄抑制因子，但是其在負反饋環路中執行功能的分子機制、對于生物鐘系統的影響，以及CHRONO對于生物鐘下游其它生理活動的影響仍不清楚。為了全面認識生物鐘的調控系統，我們對于CHRONO展開了探索研究。CHRONO作為一個脊椎動物特有的基因，目前并沒有同源基因或者蛋白的研究。CHRONO作為轉錄因子，需要進入細胞核內執行功能，而對于CHRONO的入核機制卻沒有任何信息。

發明內容

本發明目的就是為了彌補已有技術的缺陷，提供一種核定位信號肽及其序列和應用，可將基因導入細胞核中。

本發明是通過以下技術方案實現的：

CHRONO作為轉錄因子，進入細胞核對于CHRONO來說是至關重要的。為了研究其入核的機制，通過對一系列截短體或者突變體與cpVenus融合蛋白的在不同細胞中的定位統計發現，CHRONO入核是依靠其N端的Pro Gly Pro Ile Arg Cys Arg His Arg Ser Lys ValSer序列，該核定位信號與經典的單簇信號K(K/R)X(K/R)相似，然而之前對CHRONO或者直接對該序列進行經軟件預測后并未判定為核定位序列，說明CHRONO上發現的Pro Gly ProIle Arg Cys Arg His Arg Ser Lys Val Ser序列是一個新型的核定位序列。

將NLS信號與cpVenus蛋白融合表達，cpVenus獲得細胞核定位的能力。

一種核定位信號肽，所述信號肽的序列為Pro Gly Pro Ile Arg Cys Arg HisArg Ser Lys Val Ser，編碼所述信號肽的基因，得到信號肽的基因序列。

所述的信號肽基因序列為5’-CCGGGTCCTATCCGCTGCAGGCATCGATCGAAGGTTTCC-3’。

一種重組表達載體，載體包括所述的信號肽基因。

所述信號肽基因包括多個拷貝，即信號肽基因是通過多個信號肽基因序列并列組成的。

所述的多個拷貝是無間斷的連續拷貝。

一種核定位信號肽的應用，采用多肽作為核定位信號肽將目的蛋白定位于細胞核中，所述多肽序列為Pro Gly Pro Ile Arg Cys Arg His Arg Ser Lys Val Ser。

一種核定位信號肽的應用，采用多肽作為核定位信號肽將目的蛋白定位于細胞核核仁中，所述多肽序列為Pro Gly Pro Ile Arg Cys Arg His Arg Ser Lys Val Ser的2～5個串聯。