[發明專利]一種雙重熒光定量PCR檢測PDX模型小鼠細胞浸潤狀態試劑盒

有效

• 申請號: 202110146789.1
• 申請日: 2021-02-03
• 公開（公告）號: CN112899351B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 姜婷婷;肖君華;董莉;陳燁;白楊
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所(普通合伙) 31233
• 代理人: 魏峯

本發明涉及一種雙重熒光定量PCR檢測PDX模型小鼠細胞浸潤狀態試劑盒。該試劑盒包括PCR混合體系，該PCR混合體系包括人引物及探針和鼠引物和探針。該試劑盒能夠簡單、快速、準確的檢測PDX模型中的人鼠細胞比例，并且檢測靈敏度高。

技術領域

本發明屬于PDX模型小鼠細胞浸潤狀態檢測領域，特別涉及一種雙重熒光定量PCR檢測PDX模型小鼠細胞浸潤狀態試劑盒。

背景技術

人源腫瘤異種移植模型(Patient-Derived tumor Xenograft，PDX)是將病人的腫瘤組織直接移植到免疫缺陷型小鼠體內，從而建立起來的一種人源異種移植模型。PDX模型比傳統的細胞系來源異種移植(Cell-Derived tumor Xenograft，CDX)模型更好地保留了患者腫瘤的生物學和分子特征以及異質性，更加真實地概括了患者體內復雜的腫瘤異質性和藥物反應。因此，PDX模型已經成為癌癥機制研究和藥物測試的有用工具。

PDX模型通常將患者手術或者穿刺得到的新鮮實體瘤或血液樣本處理后，通過皮下、腎囊膜或原位移植到免疫缺陷小鼠體內，依靠小鼠提供的微環境進行生長，在小鼠身上成瘤以后可以進一步傳代。此種模型很好的保留了親代腫瘤生長的微環境，利于更好的表現親代腫瘤的性狀，并且維持了腫瘤的異質性。PDX模型跟臨床的藥效學結果有極高的相關性，所以它們被廣泛的應用到藥物研發當中，為研究腫瘤提供了良好的體內模型。

PDX模型小鼠是腫瘤患者的的完美替身，可替代腫瘤患者對不同的治療藥物或方案進行體內藥效學檢測，更是試藥的完美替身，但越來越多的證據表明了它的局限性，PDX模型隨著傳代次數的增加，癌細胞的保真度會下降，人的腫瘤細胞中會有小鼠細胞的不斷侵入，這可能會使得模型失去意義，阻礙了PDX模型的未來應用。因此，在PDX模型傳代過程中，必須對腫瘤細胞中人和小鼠細胞的比例進行監測。目前PDX模型浸潤狀態檢測大多數采用全基因組測序后進行生物信息學分析，并且已有的專利是利用定量PCR與數字液滴PCR相結合進行檢測(專利文獻CN 107338284 A)，操作復雜，尚未有直接應用定量PCR技術檢測PDX模型小鼠細胞浸潤狀態的相關試劑盒。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種雙重熒光定量PCR檢測PDX模型小鼠細胞浸潤狀態試劑盒，以檢測PDX模型的有效性。

本發明提供一種雙重熒光定量PCR檢測PDX模型小鼠細胞浸潤狀態引物和探針組合物，包括人引物及探針和鼠引物和探針；

所述人引物及探針為：

Human-PSMB 2-F：TCTCGTGCTGTGTCGGAC，

Human-PSMB 2-R：GGAGGCGACAAGAACATAGTC，

Human-PSMB 2-TaqMan：FAM-GGAGTACCTCATCGGTATCCAAGG-BHQ1；

所述鼠引物及探針為：

Mouse-Ren 2-F：CTCTGACAATCCTAGGGACTA，

Mouse-Ren 2-R：AAATGACACAATCACTCCAGT，

Mouse-Ren 2-TaqMan：HEX-ACGGCCATAATTAAGGGGT-BHQ1。

所述人引物及探針是針對人DNA模板，鼠引物及探針針對鼠DNA模板。

本發明還提供一種雙重熒光定量PCR檢測PDX模型小鼠細胞浸潤狀態試劑盒，包括PCR混合體系，所述PCR混合體系包括上述引物和探針組合物。

所述試劑盒還包括不同細胞比例的標準品和超純水。

所述不同細胞比例的標準品是指鼠細胞量與人細胞量的比例為1％、10％和25％。