[發(fā)明專利]一種水貂阿留申病毒VP2蛋白抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110142392.5
• 申請(qǐng)日: 2021-02-02
• 公開（公告）號(hào): CN112986562A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 易立;程悅寧;王振軍;羅國(guó)良;馮二凱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

一種水貂阿留申病毒VP2蛋白抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法，屬于血清學(xué)免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。為了更準(zhǔn)確、更方便快速地檢測(cè)水貂阿留申病毒，本發(fā)明提供了一種水貂阿留申病毒VP2蛋白抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒含有辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗水貂阿留申病毒VP2蛋白單克隆抗體，包被有純化的水貂阿留申病毒的酶標(biāo)板，陰性對(duì)照，陽性對(duì)照，底物液A，底物液B，終止液，稀釋液，洗滌液和封閉液，利用該試劑盒檢測(cè)水貂阿留申病毒具有特異性強(qiáng)、敏感性高、重復(fù)性好及檢測(cè)速度快的特點(diǎn)，該試劑盒具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于血清學(xué)免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種水貂阿留申病毒VP2蛋白抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

水貂阿留申病(Aleutian disease，AD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian diseasevirus，ADV)引起的急性、熱性、高度接觸性傳染病。AD在世界各養(yǎng)貂國(guó)家均有發(fā)生，所有品系的水貂均能感染(葛桂陽，李東麗，徐寧，欒美慧，郜艷雪，劉藝，宮慶龍，麻寶藝，盛陳艷，孫志博，冷雪，杜銳.水貂阿留申病毒研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2020,40(11):2276-2280.)。水貂阿留申病毒屬于細(xì)小病毒科細(xì)小病毒屬，病毒顆粒直徑23nm-25nm，無囊膜，呈球形二十面體結(jié)構(gòu)，約為32個(gè)殼粒，殼粒為中空管，外徑4.5nm，內(nèi)徑1nm-2nm。病毒分子量約為3×10⁶Da-5×10⁶Da。

水貂阿留申病主要癥狀是母貂空懷率和仔貂死亡率顯著增高，公貂的交配能力下降，還能影響發(fā)育而使毛皮品質(zhì)低下，造成經(jīng)濟(jì)損失，是世界公認(rèn)的養(yǎng)貂的三大疫病之一(閆文卓.水貂阿留申病毒流行病學(xué)調(diào)查及感染性克隆的構(gòu)建[D].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2020.)。典型AD水貂的組織、唾液、糞便、尿、血清及全血中的病毒均有感染性。水貂感染ADV后10天，即可在肝、脾和淋巴結(jié)中查出，且能持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間。免疫熒光研究表明ADV存在于脾臟的巨噬細(xì)胞、肝臟的枯否氏細(xì)胞，多見于細(xì)胞漿中，偶爾也可在核中見到。水貂阿留申病通過水平和垂直的方式進(jìn)行傳播。病毒由糞便、尿、唾液排出，通過糞便口腔途徑和唾液-氣霧-呼吸道途徑傳播，公貂的精液可以帶毒，患病公貂可通過交配，引起母貂的生殖道感染，然后又由母貂通過垂直傳播將病毒傳遞給胎兒。水貂阿留申病具有明顯的季節(jié)性，雖然常年都能發(fā)病，但在秋冬季節(jié)的發(fā)病率和死亡率大大增加。因?yàn)槟I臟高度損害的病貂，表現(xiàn)渴欲增高，而在秋冬季節(jié)，由于冰凍往往不能滿足其飲水，致使原來就衰竭的病貂，在這樣急劇惡化的條件下，發(fā)生大批死亡。因此，水貂阿留申病的早期診斷及防治至關(guān)重要。

水貂阿留申病毒高度變異，因此無法研制疫苗進(jìn)行防控；臨床上以淘汰感染病毒后的種獸來達(dá)到清除病毒的目的，而判斷病獸的標(biāo)準(zhǔn)即為阿留申病毒抗體陽性。由此可見，檢測(cè)抗體的方法在防治水貂阿留申病中起到了至關(guān)重要的作用(韋韜，吳艷虹，叢麗，趙永強(qiáng)，馬瑞芳，邵西群.水貂阿留申病診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2019,40(06):78-82.)。實(shí)驗(yàn)室診斷包括碘凝試驗(yàn)和對(duì)流免疫電泳檢查。目前多采用對(duì)流免疫電泳法檢查，即在感染阿留申病后第九天，產(chǎn)生沉淀性抗體，能持續(xù)190天。但是碘凝試驗(yàn)是非特異性診斷，存在很大的失誤風(fēng)險(xiǎn)；而對(duì)流免疫電泳特異性強(qiáng)，但是操作不方便，耗時(shí)長(zhǎng)，更重要的是這兩種方法通量很低(孫殿鋼.水貂阿留申病乳膠凝集試驗(yàn)抗體檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[D].吉林大學(xué),2018.)，無法達(dá)到規(guī)?；\斷，因此更新水貂阿留申病診斷方法勢(shì)在必行。

目前國(guó)際上通用的是水貂阿留申病毒抗體ELISA診斷方法，這種方法能在有限時(shí)間內(nèi)最大化的實(shí)現(xiàn)抗體效價(jià)的診斷。但是目前該方法中的第二抗體，即兔抗水貂IgG抗體并沒有商品化、標(biāo)準(zhǔn)化的產(chǎn)品(孫殿鋼，雷連成，黃盼盼，洪濤，楊柳枝，劉建方，馮新，孫長(zhǎng)江.基于B細(xì)胞表位肽的水貂阿留申病毒抗體ELISA檢測(cè)方法的建立及其在流行病學(xué)調(diào)查中的應(yīng)用[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2018,40(06):509-513.)，因此國(guó)內(nèi)的部分同類產(chǎn)品差異較大，均一化不高。

發(fā)明內(nèi)容