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[發(fā)明專利]通過抑制SD1基因的表達(dá)降低四倍體野生稻株高的方法有效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 202110141716.3 申請日: 2021-02-02
公開(公告)號: CN112813067B 公開(公告)日: 2023-05-02
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 李家洋;余泓;孟祥兵;張靜昆;劉貴富;荊彥輝;陳明江 申請(專利權(quán))人: 中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所
主分類號: C12N15/113 分類號: C12N15/113;C12N15/29;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/46
代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 代理人: 莫舒穎
地址: 100101 北京市朝陽區(qū)北辰*** 國省代碼: 北京;11
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 通過 抑制 sd1 基因 表達(dá) 降低 四倍體 野生 稻株高 方法
【權(quán)利要求書】:

1.通過抑制SD1基因的表達(dá)降低四倍體野生稻株高的方法,其特征在于,包括如下步驟:抑制受體四倍體野生稻中SD1基因的表達(dá),得到株高矮于所述受體四倍體野生稻的目的四倍體野生稻;所述SD1基因?yàn)榫幋aSD1蛋白的基因;所述蛋白質(zhì)是如下A1)或A2)的蛋白質(zhì):

A1)氨基酸序列是序列表中SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6所示的氨基酸序列的蛋白質(zhì);

A2)在A1)的N末端或/和C末端連接蛋白標(biāo)簽得到的融合蛋白質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過抑制SD1基因的表達(dá)降低四倍體野生稻株高的方法,其特征在于,所述SD1基因具體為如下E1或E2所示的DNA分子:

E1、編碼鏈的編碼序列是序列表中SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4所示的DNA分子;

E2、核苷酸序列是序列表中SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示的DNA分子。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的通過抑制SD1基因的表達(dá)降低四倍體野生稻株高的方法,其特征在于,所述抑制SD1基因的表達(dá)通過CRISPR/Cas9方法實(shí)現(xiàn),所述CRISPR/Cas9方法,其的靶序列為位于SD1基因中任一包括XXXNGG的核苷酸序列上的XXX序列;其中,XXX為所述的DNA分子序列中任意19-20?bp的核酸序列,N為A、T、G、C中的任意一個核苷酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的通過抑制SD1基因的表達(dá)降低四倍體野生稻株高的方法,其特征在于,所述的靶序列為序列表中SEQ?ID?No.2第504位-第523位和SEQ?ID?No.2第627位-第646位所示的序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的通過抑制SD1基因的表達(dá)降低四倍體野生稻株高的方法,其特征在于,所述CRISPR/Cas9系統(tǒng)包括如下1)或2):

1)sgRNA,所述sgRNA為sgRNA1和sgRNA2;

所述sgRNA1的靶點(diǎn)為SEQ?ID?No.2第504位-第523位所示;

所述sgRNA2的靶點(diǎn)為SEQ?ID?No.2第627位-第646位所示;

2)表達(dá)所述sgRNA的CRISPR/Cas9載體。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的通過抑制SD1基因的表達(dá)降低四倍體野生稻株高的方法,其特征在于,所述目的四倍體野生稻為滿足如下條件的四倍體野生稻:CC亞基因組和DD亞基因組在兩個sgRNA的靶點(diǎn)區(qū)域發(fā)生突變。

7.四倍體野生稻矮化試劑,其特征在于,所述試劑的活性成分為抑制編碼權(quán)利要求1中所述的SD1蛋白的基因的表達(dá)、降低權(quán)利要求1中所述的SD1蛋白的豐度、和/或敲除編碼所述SD1蛋白的基因的物質(zhì)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的四倍體野生稻矮化試劑,其特征在于,所述物質(zhì)為CRISPR/Cas9系統(tǒng);

所述CRISPR/Cas9系統(tǒng)包括如下1)或2):

1)sgRNA,所述sgRNA為sgRNA1和sgRNA2;

所述sgRNA1的靶點(diǎn)為SEQ?ID?No.2第504位-第523位所示;

所述sgRNA2的靶點(diǎn)為SEQ?ID?No.2第627位-第646位所示;

2)表達(dá)所述sgRNA的CRISPR/Cas9載體。

9.CRISPR/Cas9系統(tǒng),其特征在于,所述CRISPR/Cas9系統(tǒng)包括如下1)或2):

1)sgRNA,所述sgRNA為sgRNA1和sgRNA2;

所述sgRNA1的靶點(diǎn)為SEQ?ID?No.2第504位-第523位所示;

所述sgRNA2的靶點(diǎn)為SEQ?ID?No.2第627位-第646位所示;

2)表達(dá)所述sgRNA的CRISPR/Cas9載體。

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