[發明專利]Sylvestin的制備方法

有效

• 申請號: 202110136257.X
• 申請日: 2021-02-01
• 公開（公告）號: CN112759632B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 張偉;賴仞;段銀;呂秋敏;文永均;郭德文;張治業
• 申請（專利權）人: 昆明龍津藥業股份有限公司;中國科學院昆明動物研究所
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/04;C07K1/08;C07K1/06
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

本發明屬于多肽藥物制備方法技術領域，特別涉及Sylvestin的制備方法。該方法采用固相合成方式，分段合成Sylvestin；所述分段的數量為2～4段，其中N末端的片段至少含有12個氨基酸殘基。本發明提供的方案顯著提高了粗品純度和產品總收率，具有廣泛的實用價值和應用前景。

技術領域

本發明屬于多肽藥物制備方法技術領域，特別涉及Sylvestin的制備方法。

背景技術

森林山蛭抗血栓肽Sylvestin是森林山蛭鎮痛肽基因編碼的一種單鏈多肽，分子量4790.5道爾頓，等電點6.28。Sylvestin的肽序為：Thr-Ser-Glu-Pro-Val-Cys-Ala-Cys-Pro-Lys-Met-Leu-Phe-Trp-Val-Cys-Gly-Lys-Asp-Gly-Glu-Thr-Tyr-Thr-His-Pro-Cys-Ile-Ala-Lys-Cys-His-Asn-Val-Glu-Val-Glu-His-Asp-Gly-Lys-Cys-Lys-OH。

研究表明，Sylvestin能夠抑制FXIIa和kallikrein，有極顯著的抗血栓和抑制急性腦出血的作用；可作為制備FXIIa、kallikrein抑制劑和抗血栓和抑制急性腦出血藥物應用。

目前，Sylvestin的制備通常采用基因工程的手段，化學合成不僅成本更低，且反應條件也相對更簡單。但目前尚未見，Sylvestin的化學合成方法的報道。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供Sylvestin的制備方法。

本發明提供的Sylvestin的制備方法，其采用固相合成方式，分段合成Sylvestin；所述分段的數量為2～4段，其中N末端的片段至少含有12個氨基酸殘基。

一些實施例中，所述分段的數量是4段，其中：

片段a的序列為Thr-Ser-Glu-Pro-Val-Cys-Ala-Cys-Pro-Lys-Met-Leu-Phe，

片段b的序列為-Trp-Val-Cys-Gly-Lys-Asp-Gly-Glu，

片段c的序列為-Thr-Tyr-Thr-His-Pro-Cys-Ile-Ala-Lys-Cys，

片段d的序列為-His-Asn-Val-Glu-Val-Glu-His-Asp-Gly-Lys-Cys-Lys。

另一些實施例中，所述分段的數量是2段，其中：

片段a的序列為Thr-Ser-Glu-Pro-Val-Cys-Ala-Cys-Pro-Lys-Met-Leu，

片段b的序列為-Phe-Trp-Val-Cys-Gly-Lys-Asp-Gly-Glu-Thr-Tyr-Thr-His-Pro-Cys-Ile-Ala-Lys-Cys-His-Asn-Val-Glu-Val-Glu-His-Asp-Gly-Lys-Cys-Lys。

本發明實施例中，對Sylvestin的制備采用逐一接入的方式或分段接入的方式進行，結果表明，分段接入的方式更有利于提高合成產物的收率和純度。在分段接入的方案中，分段方式和保護基團的選擇都會影響合成效果。

在本發明中，Thr、Ser、Tyr的側鏈保護基為tBu；Glu、Asp的側鏈保護基為OtBu；Cys、His、Asn的側鏈保護基為Trt；Lys、Trp的側鏈保護基為Boc。

在本發明中，對第一位氨基酸Thr的保護，可僅采用tBu對側鏈進行保護，也可在N端添加Boc保護基。

因此，一些實施例中，所述分段的數量是2段，